[發明專利]分離干細胞的方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201210096966.0
• 申請日: 2012-04-01
• 公開（公告）號: CN103361299A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 張文煒;楊光華
• 申請（專利權）人: 張文煒
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0789
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.碘海醇在制備干細胞純化液中的用途。

2.一種用于分離干細胞的組合物，其特征在于，包含：

碘海醇；以及平衡鹽溶液，

其中，所述碘海醇溶解于所述平衡鹽溶液中，

任選地，所述平衡鹽溶液為選自HBSS和GBSS的至少一種，優選HBSS，

任選地，每100ml平衡鹽溶液含有8-15g碘海醇，優選每100ml平衡鹽溶液含有13g碘海醇，

任選地，進一步包含細胞生長因子，優選進一步包含10-30ng/ml的人堿性成纖維生長因子以及10-30ng/ml的人干細胞生長因子-α，

任選地，所述組合物的pH為7-8。

3.一種分離干細胞的方法，其特征在于，包括下列：

將含有干細胞的生物樣本與紅細胞分離液混合，并靜置沉降以便得到含有干細胞的上層細胞液；

將所述含有干細胞的上層細胞液離心濃縮，得到細胞沉淀；

用第一干細胞純化液將所述細胞沉淀進行重懸浮，得到懸浮液；

將所述懸浮液加入到第二干細胞純化液中并離心，以收集干細胞，

其中，

所述紅細胞分離液為0.2-0.7重量％的甲基纖維素水溶液，優選0.5重量％的甲基纖維素水溶液，

所述第一干細胞純化液為選自平衡鹽溶液和細胞培養液的至少一種，

任選地，所述平衡鹽溶液為選自HBSS和GBSS的至少一種，優選所述平衡鹽溶液為HBSS，所述細胞培養液為MEM培養液，

所述第二干細胞純化液為權利要求2所述的組合物。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述含有干細胞的生物樣本為選自脊髓液和臍帶血的至少一種，優選抗凝脊髓液或臍帶血。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述含有干細胞的生物樣本與所述紅細胞離心液按照體積比4∶1混合。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，進一步包括，使用細胞處理液對所得到的干細胞進行清洗至少一次，優選兩次，

其中，

所述細胞處理液為選自磷酸緩沖液和生理鹽水的至少一種。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述紅細胞分離液、第一干細胞純化液、第二干細胞純化液和細胞處理液的至少之一進一步包含：

10-30ng/ml的人堿性成纖維生長因子以及10-30ng/ml的人干細胞生長因子-α。

8.一種用于分離干細胞的試劑盒，其特征在于，包括：

紅細胞分離液；

第一干細胞純化液；以及

第二干細胞純化液，

其中，

所述紅細胞分離液為0.2-0.7重量％的甲基纖維素水溶液，優選0.5重量％的甲基纖維素水溶液，

所述第一干細胞純化液為選自平衡鹽溶液和細胞培養液的至少一種，任選地，所述平衡鹽溶液為選自HBSS和GBSS的至少一種，優選所述平衡鹽溶液為HBSS，所述細胞培養液為MEM培養液，以及

所述第二干細胞純化液為權利要求2所述的組合物，

任選地，所述紅細胞分離液、第一干細胞純化液和第二干細胞純化液分別設置在不同的容器中。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，進一步包括細胞處理液，所述細胞處理液為磷酸緩沖液和生理鹽水的至少一種，

任選地，所述紅細胞分離液、第一干細胞純化液、第二干細胞純化液和細胞處理液分別設置在不同的容器中，

任選地，所述紅細胞分離液、第一干細胞純化液、第二干細胞純化液和細胞處理液的至少之一進一步包含：

10-30ng/ml的人堿性成纖維生長因子以及10-30ng/ml的人干細胞生長因子-α。

10.權利要求8或9所述的試劑盒在分離干細胞中的用途。