[發明專利]蛋白A免疫吸附材料及其制備方法

有效

• 申請號: 201210096913.9
• 申請日: 2012-04-05
• 公開（公告）號: CN102614843A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 張旭鋒;李樹興
• 申請（專利權）人: 云南澳敦生物科技有限公司
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/30;B01D15/22
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫用生物材料領域，具體涉及一種用于吸附抗體的蛋白A免疫吸附材料及其制備方法。

背景技術

即使在醫學發達的今日，人類仍有很多疑難疾病無法攻克，自身免疫性疾病就是其中一種。自身免疫性疾病發病機制復雜，可累及全身多器官、多系統，傳統治療方法以糖皮質激素和細胞毒藥物為主，治療效果一直不佳。自身免疫性疾病已經成為威脅人類健康與生命的主要疾病之一。

自身免疫性疾病以患者血清或其它體液中可檢測到一種或多種高滴度的自身抗體為特點，自身抗體是診斷自身免疫性疾病的重要依據，每種自身自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗體譜，是早期診斷必不可少的生物學指標。病人血液中存在高效自身抗體是自身免疫性疾病的特點之一，也是臨床確診自身免疫疾病的重要依據。某些自身抗體因對疾病的診斷具有高度特異性，已成為診斷相應疾病的金標準，目前比較公認的標志性抗體有10多種，例如抗ds-DNA、抗Sm抗體僅發現于系統性紅斑狼瘡患者中；抗線粒體抗體(AMA-M2)是原發性膽汁性肝硬化的標志性抗體；抗角蛋白抗體是類風濕性關節炎的標志性抗體等等。因此，如果能夠除去患者體內這些自身抗體，則有望抑制自身抗體對全身器官的攻擊，緩解病情，減輕免疫抑制劑的用藥量，使患者早日康復。

蛋白A是某些金黃色葡萄球菌細胞壁上的一種蛋白質，其分子量為約42kD，其氨基末端含有4個高度類似的免疫球蛋白Fc段結合區，可與人血漿中的抗體及其免疫復合物的Fc段特異結合。如果將蛋白A固定在某一載體上制備成載體-蛋白A復合物免疫吸附柱，當人體血漿通過該吸附柱時，血漿中的抗體及其免疫復合物就會被特異性地吸附，一些因抗體和免疫復合物導致的疾病，如系統性紅斑狼瘡、自身免疫性疾病、器官移植、惡性腫瘤等即可得到治療與緩解。

1984年瑞典Excorim公司將蛋白A固定在瓊脂糖凝膠(Sepharose?CL-4B)上，用于吸附患者血漿中的致病抗體。該吸附材料每毫升可吸附20mg抗體，每支吸附柱一次可吸附1.2g左右抗體(每支吸附柱填充62.5ml吸附劑)。一般而言，患者體內抗體總量為20～30g，為達到清除抗體的目的，該吸附柱必須反復多次吸附10次以上。為保證吸附柱重復、安全使用，該公司還生產了與免疫吸附柱配套使用的設備：連續免疫吸附治療監視與控制系統(CITEM?10)，由預制電腦程序控制兩個吸附柱交替“吸附-再生-吸附”，循環進行，每支吸附柱與患者血漿反復接觸、吸附10次，實現對致病物質清除的連續性和相對非受限性。

目前，關于蛋白A免疫吸附材料合成方法的專利很多，一般情況下通過蛋白A分子鏈上的伯氨基與其它基團反應固定在瓊脂糖凝膠基質上，由于伯胺基的化學反應活性不高，公開的文獻和專利的實驗數據顯示，通過蛋白A上的伯氨基與載體反應后，固定在載體上的蛋白A含量為3～10mg/mL載體，合成得到的材料每毫升吸附10～25mg抗體，由于吸附柱對抗體的吸附能力不高，不能一次性灌流達到清除致病抗體的目的，吸附柱必須配套CITEM?10系統，這阻礙了蛋白A免疫吸附療法在臨床上的廣泛應用。

發明內容

本發明提供一種高吸附性能的蛋白A免疫吸附材料及其制備方法。

本發明的技術方案：一種蛋白A免疫吸附材料，是瓊脂糖凝膠與蛋白A偶聯的高分子材料，所述蛋白A是帶有半胱氨酸的重組蛋白A，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1。

所述固定在瓊脂糖凝膠基質上的重組蛋白A含量為10-20mg/mL。

所述的蛋白A免疫吸附材料的制備方法，包括以下步驟：

(1)、重組蛋白A的制備：將一個半胱氨酸殘基引入蛋白A的C端或N端，得到重組蛋白A；

(2)、瓊脂糖凝膠的活化：將瓊脂糖凝膠與0.2M高碘酸鈉溶液混合，振搖反應，蒸餾水洗滌、抽干，得到活化瓊脂糖凝膠；

(3)、免疫吸附材料的合成：將步驟(1)的重組蛋白A溶于0.1mol/L的硼酸緩沖溶液，然后與步驟(2)的活化瓊脂糖凝膠混合，第一次振搖反應，蒸餾水洗滌、抽干，最后再加入含1％硼氫化鈉的磷酸鹽緩沖溶液，第二次振搖反應，蒸餾水洗滌、抽干，得到蛋白A免疫吸附材料。

步驟(2)中瓊脂糖凝膠與高碘酸鈉溶液的重量比為1∶1-2。

步驟(2)中振搖反應溫度為室溫、時間2-6小時、搖速50-200rpm。

步驟(3)中重組蛋白A與活化瓊脂糖凝膠的重量體積比為12-25mg/ml。

步驟(3)中活化瓊脂糖凝膠、硼酸緩沖溶液、磷酸緩沖溶液的體積比為1∶1-2∶1-3。