[發明專利]一種去除污水中金屬鉻的基因的合成及其應用

無效

• 申請號: 201210095585.0
• 申請日: 2012-04-02
• 公開（公告）號: CN102628051A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 雷春生;雷思宇;謝芳
• 申請（專利權）人: 常州亞環環保科技有限公司
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12N15/74;C12N15/89;A01H5/00;C02F3/32;C02F101/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種富集污染水體中低濃度鉻含量的基因蛋白的合成及其應用，其特征在于具體制備過程為：

?(1)?培養基的制備

?????以質量計，葡萄糖?8~10g、磷酸氫二鉀?0.2~0.5g、硫酸鎂?0.1~0.2g、瓊脂?10~12g、氯化鈉?0.8~1.0g、?硫請酸鎂?0.1~0.3g、磷酸氫二鉀?0.3~0.5g?、牛肉膏?5.0~6.0g、蛋白胨?7.0~10.[微軟用戶1]?；

?????將上述物質溶解，加蒸餾水定容至1000mL，分裝、在高壓蒸汽滅菌鍋內殺菌，?殺菌條件為：壓力：105Kpa；溫度：120°C；時間：20~30min，備用；

（2）耐鉻DNA片段提取

?????從金魚藻細胞中提取DNA分子，用BgIⅡ型限制性內切酶切割DNA分子，獲得耐鉻基因的DNA序列；

?(3)體外DNA重組

?????從半知菌細胞中提取質粒作為運載體，用BgIⅡ型限制性內切酶切割形成開環質粒，加入DNA連接酶，將耐鉻基因連接在質粒環上，形成一個重組DNA分子；

（4）重組DNA導入受體細胞與篩選

?????將重組得到的DNA導入用CaCl₂處理的魚孢菌中，接種到15~20mL的培養基中，置于生物培養箱中培養，溫度控制在37~37.3°C，培養時間為15~18h；再將該培養液轉移到50mL預冷的無菌離心管中，在4~6°C下以300~350r/min的轉速離心2~3h，除去上層清液；再用3~5mL?0.1mol/LCaCl₂溶液洗滌沉淀，靜置10~15min，再4~6°C下以200~400r/min的轉速培養35~45min，濾去上層清液，獲得細胞沉淀；并篩選含耐鉻基因的受體細胞，保存于4~6°C下備用。

2.根據權利要求1所述一種富集污染水體中低濃度鉻含量的基因蛋白的合成及其應用，其特征在于應用方法為：將該耐鉻擬球蛋白基因的細胞以體積比1：4~8溶解于0.05mo/L氯化鈉溶液中，其中，耐鉻擬球蛋白基因的濃度為0.20g/L~0.25g/L，注射4~6mL于槐葉萍的根部，給藥期為15天，三天注射一次，35天后，檢測到槐葉萍對低濃度鉻的富集的濃縮因子可達51200~82000。