[發(fā)明專利]一種甘薯黑斑病苗期抗性鑒定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210095052.2
• 申請(qǐng)日: 2012-04-01
• 公開（公告）號(hào): CN102612962A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫厚俊;謝逸萍;趙永強(qiáng);徐振;楊冬靜;張成玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇徐州甘薯研究中心
• 主分類號(hào): A01G1/00
• 分類號(hào): A01G1/00;A01G7/00
• 代理公司: 徐州市三聯(lián)專利事務(wù)所 32220
• 代理人: 何君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種農(nóng)作物病害抗性鑒定方法，具體的說就是一種甘薯黑斑病苗期抗性鑒定方法，屬于農(nóng)業(yè)植物保護(hù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甘薯黑斑病是一種主要危害甘薯根系及莖基部的重要真菌病害，世界各甘薯產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生。1937年傳入我國(guó)，現(xiàn)有26個(gè)省、直轄市、自治區(qū)發(fā)生該病，在甘薯苗床、大田和儲(chǔ)藏期均可為害，是我國(guó)北方薯區(qū)的三大嚴(yán)重病害之一。薯苗受侵染后，在莖部產(chǎn)生凹陷的圓形或梭形小黑斑，后逐漸擴(kuò)大，環(huán)繞薯苗基部呈黑腳狀，地上部分葉片發(fā)黃或使幼苗基部變黑腐爛。帶病薯苗移栽大田1-2星期后，基部葉片發(fā)黃脫落，病重時(shí)，根部腐爛，僅殘存纖維狀維管束，薯苗枯死。儲(chǔ)藏期薯塊受害后，病斑初為黑色小點(diǎn)，逐漸擴(kuò)大成圓形或梭形病斑，中間產(chǎn)生黑色刺狀物，與其他真菌和細(xì)菌并發(fā)，易引起腐爛。我國(guó)每年因該病造成的產(chǎn)量損失在10%左右。

研究表明，抗病品種的選育和推廣是控制該病害的主要手段。因此，有效、快速、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)品種抗性顯得尤其重要。對(duì)甘薯黑斑病的抗性鑒定研究多以薯塊為材料，薯苗對(duì)黑斑病的抗性鑒定研究則較少。邱瑞鐮等（1990）采用大田薯蔓注射針接種鑒定，但由于不同品種間薯蔓長(zhǎng)勢(shì)及木質(zhì)纖維素含量的不同，易導(dǎo)致結(jié)果的誤差。

發(fā)明內(nèi)容

????本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種甘薯黑斑病苗期抗性鑒定方法。該方法通過將生長(zhǎng)一致的甘薯頂尖幼苗去掉下部葉柄后，浸入配制好濃度為1×10⁴個(gè)/ml的黑斑病孢子懸浮液中，六天后能快速分辨出不同品種薯苗對(duì)黑斑病的抗感程度等步驟，能快速、準(zhǔn)確的確定薯苗對(duì)黑斑病的抗性程度，具有簡(jiǎn)便，易學(xué)，省時(shí)省力等優(yōu)點(diǎn)，為甘薯抗病育種篩選大批材料提供技術(shù)支持。

本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種甘薯黑斑病苗期抗性鑒定方法，其特征是：按如下步驟進(jìn)行：

（1）?病菌分離與培養(yǎng)：從田間采集發(fā)病薯塊，用真菌分離方法分離出黑斑病菌，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，備用；

（2）?參試薯苗準(zhǔn)備：從苗床或田間剪取6棵生長(zhǎng)一致的甘薯頂尖幼苗，視薯苗節(jié)間長(zhǎng)短以5-6個(gè)節(jié)間為宜，帶回試驗(yàn)室后從葉柄基部剪掉最下面兩片葉片，用滅菌水把薯苗莖基部清洗干凈，備用；

（3）?接種菌液的配制：將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的分生孢子用無菌水沖洗下來，用無菌水配制成濃度為1×10⁴個(gè)/ml的孢子懸浮液備用；

（4）?接種鑒定：將配制好的孢子懸浮液分裝在容量為250ml的無菌三角瓶中，然后將供試薯苗輕放入三角瓶中，每品種3棵，為3次重復(fù)，在25-27℃下培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)空白無菌水為對(duì)照，三角瓶培養(yǎng)液消耗后用無菌水添加；

（5）?調(diào)查評(píng)價(jià)：6天后調(diào)查薯苗水面以下部分黑斑病發(fā)病情況，并根據(jù)發(fā)病程度將薯苗分為0-4級(jí)共5個(gè)等級(jí)，根據(jù)受害等級(jí)將品種對(duì)黑斑病的抗性分為抗病、中抗和感病三個(gè)級(jí)別；

（6）薯苗受害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：看不到病癥；1級(jí)：有零星小病斑出現(xiàn)，病斑數(shù)≤20個(gè)；2級(jí)：病斑較大，且病斑數(shù)﹥20個(gè)，但不連片；3級(jí)：病斑較多，且斑點(diǎn)連成片，長(zhǎng)度≤2cm；4級(jí)：病斑連片，且連片長(zhǎng)度﹥2cm；

（7）平均發(fā)病級(jí)別=（重復(fù)I級(jí)別+重復(fù)Ⅱ級(jí)別+重復(fù)Ⅲ級(jí)別）/3；抗病級(jí)別確定：抗?。菏芎?jí)別≤1.0；中抗：1.0＜受害級(jí)別＜3.0；感?。菏芎?jí)別≥3.0。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：該方法以苗床或大田薯苗莖尖為材料，室內(nèi)接種黑斑病菌鑒定抗病性，能夠準(zhǔn)確、快速、直觀的表現(xiàn)出不同品種薯苗對(duì)甘薯黑斑病的抗性水平。該方法更接近于田間甘薯幼苗感染黑斑病的實(shí)際情況，操作簡(jiǎn)單、易學(xué)，對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求不高，各育種單位均能開展鑒定工作。該鑒定方法能為甘薯抗病育種前期鑒定提供技術(shù)支持，剔除部分感病品種，為后期品種篩選減輕人力、物力。同時(shí)，以苗床或大田薯苗莖尖為鑒定材料，能最大限度的減少取材的差異性，降低試驗(yàn)誤差。室內(nèi)滅菌接種，易于試驗(yàn)條件控制，也增強(qiáng)了結(jié)果的準(zhǔn)確性。該方法的推廣使用，對(duì)于篩選抗病品種和指導(dǎo)甘薯抗病育種具有重要意義和現(xiàn)實(shí)作用。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明：

實(shí)施例、

甘薯黑斑病苗期抗性鑒定方法，我們對(duì)苗床采集的13個(gè)甘薯品種的薯苗進(jìn)行黑斑病抗性鑒定試驗(yàn)，按如下步驟進(jìn)行：

（1）病菌分離與培養(yǎng)：從田間采集發(fā)病薯塊，用真菌分離方法分離出黑斑病菌，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，備用；