[發明專利]PCR檢測解脲脲原體生物群的試劑盒

無效

• 申請號: 201210094844.8
• 申請日: 2012-04-01
• 公開（公告）號: CN103361405A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 朱長太;鄭瑞娟;胡忠義;劉忠華
• 申請（專利權）人: 上海市肺科醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 劉懿

技術領域

本發明涉及一種PCR檢測試劑盒，尤其涉及一種用于檢測解脲脲原體生物群的試劑盒、以及檢測方法。

背景技術

解脲脲原體（Ureaplasma?urealyticum，UU）又稱為溶脲脲原體，能利用自身的尿素酶，分解尿素后以提供代謝的能源，是人類泌尿生殖道常見的寄生菌之一，與人類泌尿生殖道感染有密切關系，現已被列為性傳播疾病的病原體。解脲脲原體的致病物質主要有脲酶，IgA蛋白酶及磷脂酶等。

研究解脲脲原體與疾病的關系最早是從非淋病性尿道炎開始的，近年來，大量研究證實：解脲脲原體與非淋病性尿道炎、前列腺炎、婦科疾病、不育癥等多種疾病有關，由此，解脲脲原體對人體健康的危害不容忽視，有必要予以關注。

以往解脲脲原體感染主要由經驗豐富的醫生通過臨床經驗進行診斷，誤診率較高；病原體培養診斷則常常受到病原體培養、標本運送、培養時間等因素的限制。為了找到更好的解脲脲原體檢測方法，人們做出了許多努力，如專利CN101407836B和CN102277429A中分別公開的基因芯片探針、CN101555457A中公開的支原體培養基及檢測方法、CN101566621A公開的檢測試紙、CN101851661A公開的檢測方法等，均可以用于檢測解脲脲原體。

隨著PCR技術的發展，PCR方法檢測已在臨床上加以應用。熒光定量PCR技術以其靈敏度高、速度快、特異性強等優點，在基因表達分析、病原體定性、和定量檢測方面得到了廣泛的應用，并已成為當前病毒核酸定量檢測的主要方法，并已有大量的檢測試劑盒和檢測方法被公開或商業化，如CN1086739C公開的PCR檢測方法和引物、CN100352944C公開的熒光定量PCR試劑盒、CN101497926A公開的多重熒光定量PCR檢測試劑盒、CN102191321A公開的用于PCR檢測的試劑盒。

目前，解脲脲原體可被分為兩大群生物1群（Ureaplasma?Parvum，Biovar?1，?parvo）和生物2群（Ureaplasma?urealyticum，Biovar?2，T?960）共14個血清型，解脲脲原體生物分群對于進一步研究解脲脲原體的生物學特性及與臨床致病性的關系都具有重要意義。

目前，研究中常以生長抑制試驗（growth?inhibition?test，GIT）或代謝抑制試驗（metabolism?inhibition?test,?MIT）檢測解脲脲原體的生物群和生物型，即通過將多克隆抗解脲脲原體血清添加到解脲脲原體的固體或液體培養基中，通過觀察抑制解脲脲原體生長情況判斷實驗結果。這一方法不僅成本高耗時（通常需要數天至一周），而且免疫血清易發生交叉反應（5型和2型，14型和3型，8型和13型）導致結果特異性差。而常規PCR技術雖可完成解脲脲原體生物群的快速檢測，但其易受污染，出現假陽性，且無法完成定量檢測。

鑒于目前臨床上尚缺乏較好的解脲脲原體快速分群的方法，由此急需開發解脲脲原體生物群檢測的新方法。

發明內容

針對目前臨床上缺乏較好的解脲脲原體快速分群的方法，本發明提供了一種用于實時定量PCR檢測解脲脲原體生物群的引物、試劑盒、以及檢測方法。

本發明的第一個方面是提供一種用于實時定量PCR檢測解脲脲原體生物1群的引物，所述引物如下：

正向引物：5′-ACATCAGYTGAAAACAAAACAG-3′??????????SEQ?ID?No.1

反向引物：5′-?GTT?TTGGTTCACGAGGTAAT?-3′???????????????SEQ?ID?No.2

本發明的第二個方面是提供一種用于實時定量PCR檢測解脲脲原體生物2群的引物，所述引物如下：

正向引物：5′-CACTTACTTAACAARAAAATCYACGT-3′??SEQ?ID?No.3

反向引物：5′-GCAGTTTTTAGTAAKCCACCT?T-3′??????????SEQ?ID?No.4

本發明的第三個方面是提供一種用于實時定量PCR檢測解脲脲原體生物1群的熒光探針的核苷酸序列，所述熒光探針序列如下：

5′-AAAAGGTCATTTGRTTGGTGAA?AAA-3′???????????????SEQ?ID?No.5

本發明的第四個方面是提供一種用于實時定量PCR檢測解脲脲原體生物2群的熒光探針的核苷酸序列，所述熒光探針序列如下：