[發明專利]一種檢測肝癌相關風險基因的試劑盒

無效

• 申請號: 201210094755.3
• 申請日: 2012-03-31
• 公開（公告）號: CN103361404A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 任峻;張華忠
• 申請（專利權）人: 浙江愛易生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及分子生物學和醫學領域，更具體的，本發明涉及一種檢測肝癌相關風險基因的試劑盒，通過同時檢測與肝癌關聯的基因MICA和HLA-DQ的單核苷酸多態性位點基因型來評估個體罹患肝癌的風險性。

背景技術

肝癌是指發生于肝臟的惡性腫瘤，包括原發性肝癌和轉移性肝癌兩種，人們常說的肝癌指的多是原發性肝癌。原發性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，根據最新統計，全世界每年新發肝癌患者約六十萬，居惡性腫瘤的第五位。隨著人類在基因方面的不斷深入研究，先已發現了兩個與肝癌相關的風險基因，分別是MICA和HLA-DQ。

MHC-I類鏈相關基因（Major?histocompatibility?complex?class?I?chain-related?gene，MIC）定位于人類第6號染色體MHC-I類基因區域，包括MICA、MICB、MICC

、MICD、MICE、MICF和MICG，其中僅MICA、MICB為功能基因，可編碼功能蛋白，其它5種均為假基因。

????MICA基因編碼的蛋白產物屬于膜蛋白，分為胞外區、跨膜區和胞漿區。MICA的表達具有組織特異性，研究發現MICA蛋白僅表達于新鮮分離的內皮細胞、成纖維細胞和胃腸道上皮細胞表面。在各種變異細胞，特別是上皮細胞來的腫瘤細胞中MICA分子的表達可發生上調。病毒感染、受熱等也會引起MICA表達的變化，因此MICA被認為是一種應激性蛋白。NKG2D（the?actiating?killer?cell?lectin-like?receptor?K?，NKG2D）是MICA的受體，可表達于多種免疫細胞，在NK、γδ⁺T細胞和CD8⁺T細胞介導的對腫瘤和感染的免疫反應中起重要作用，參與適應性及固有性免疫應答。

????MICA已被發現在多種腫瘤中出現高表達，如乳腺癌、肺癌、消化道腫瘤、前列腺癌等，并且這些腫瘤中會出現高水平的γδ⁺T細胞浸潤，γδ⁺T細胞通過識別MICA分子對表達MICA的細胞有較強的細胞毒作用，這種腫瘤免疫監視機制在早期對抗腫瘤有一定積極作用。Wagsater等研究了直腸癌中MICAmRNA的表達水平，發現直腸癌中MICA的表達水平增高，提示MICA可能是免疫系統實施免疫監視的效應分子之一。免疫系統通過MICA與NKG2D的結合，激活NK等免疫細胞以清除腫瘤細胞。

????人類MHC主要為人白細胞抗原（human?leukocyte?antigen，HLA），分為Ⅰ類和Ⅱ類。MHCⅡ類分子只在少數細胞表達，如樹突狀細胞、B淋巴細胞等，其中最具代表性的為HLA-DR和HLA-DQ抗原。HLA-DR，-DQ通過MHCⅡ類分子限制的T細胞對外來抗原的識別，在介導淋巴細胞活化、抗原遞呈等機體免疫應答和免疫調節過程中發揮重要的作用。

????經過研究，我們認為HLA-DR和-DQ在肝癌組織中的表達機制有一下可能：（1）肝癌細胞中有明顯的低甲基化和局部高甲基化，Ⅱ類分子表達主要受Ⅱ類反式激活因子（Class?Ⅱ?trans?–?activator，CⅡTA）的調控，CⅡTA啟動子由DNA甲基化調控，使用5-aza-CdR處理后或傳染CⅡTA基因均可誘導上述瘤細胞MHCⅡ的表達，并使瘤細胞恢復抗原處理和遞呈的功能，而達到增強CTL和抗體依賴的特異免疫反應的目的。在人類腫瘤中，如絨癌、白血病、T細胞來源的惡性腫瘤以及視網膜母細胞均缺乏MHCⅡ的表達，其機制也與CⅡTA的高甲基化有關。（2）腫瘤組織刺激機體產生炎癥反應，浸潤型T細胞釋放多種細胞因子，這些細胞因子有誘導腫瘤細胞表達HLA-DR等。IFN-γ等多種細胞因子對血源性或非血源性的組織都能夠誘導其表達HLAⅡ類分子，但提前是CⅡTA基因必須是未甲基化的。在我國HCC多數伴有HBV感染,因此在慢性肝炎、肝硬化及肝癌這個發展過程中，CⅡTA基因發生不同程度的低甲基化，在炎癥細胞釋放的細胞因子的誘導下，肝癌細胞發生不同程度的HLA分子的表達。

????總之，正常肝細胞中是不表達或弱表達的，在肝癌細胞中HLAⅡ類分子的表達可能是按照上述兩個可能的順序發生的。首先是要有CⅡTA啟動子去甲基化，然后由IFN-γ等細胞因子提供促進HLA表達的信號。

發明內容

基于MICA基因、HLA-DQ基因上的2個SNPs位點多態性可用來評估個體罹患肝癌風險性的基礎上，本發明提供一種檢測肝癌相關風險基因的試劑盒。

試劑盒包括：