[發明專利]一種用于城鄉污染河道水體修復的微生物-酶復合制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201210094446.6
• 申請日: 2012-04-01
• 公開（公告）號: CN102815792A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 湯江武;王新;姚曉紅;吳逸飛;周莉;謝尚侃
• 申請（專利權）人: 浙江綠凱環保科技有限公司;浙江省農業科學院
• 主分類號: C02F3/34
• 分類號: C02F3/34;C12N1/20;C12N9/50;C12N9/42;C12N9/26;C12R1/10;C12R1/38;C12R1/40
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 向慶寧

1.一種用于城鄉污染河道水體修復的菌-酶復合制劑，包含微生物和復合酶兩類組分，其特征在于：

(1)、所述微生物由保藏號為CCTCCM?2011423的地衣芽孢桿菌BFT-4(Bacillis?Licheniformis?BFT-4)，保藏號為CCTCC?M?2011425的施氏假單胞菌BRH(Pseudomonas?stutzeri?BRH)，和保藏號為CCTCC?M?2011427的惡臭假單胞菌BRZ-1(Pseudomonas?putida?BRZ-1)組成，其中，各組分微生物在微生物總質量中的質量百分比為：地衣芽孢桿菌30-60％，施氏假單胞菌25-35％，惡臭假單胞菌15-35％；

(2)、所述復合酶包括蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶，復合酶各組分的質量百分比為：蛋白酶40％-60％，淀粉酶15-25％，纖維素酶25％-35％，其中，酶活均不小于1萬U/g。

2.一種制備如權利要求1所述的菌-酶復合制劑的方法，其中，微生物由各組分微生物分別制備成固體菌劑后按比例混合制成，其特征在于：該方法按以下步驟進行：

(1)、各級培養基的配置的方法如下：

a)、斜面培養基：牛肉膏蛋白胨固體培養基，備用；

b)、搖瓶菌種培養基和種子罐發酵培養基：牛肉膏蛋白胨液體培養基，備用；

c)、批量生產培養基：地衣芽孢桿菌BFT-4采用固體發酵，培養基為：麩皮80-90％，礱糠：5-15％，葡萄糖3％，K₂HPO₄2％，D生物素0.05％，按料水比1∶1加入水分；施氏假單胞菌BRH和惡臭假單胞菌BRZ-1均采用牛肉膏蛋白胨液體培養基；

(2)、搖瓶菌種擴增：分別將用斜面培養基活化的地衣芽孢桿菌BFT-4、施氏假單胞菌BRH和惡臭假單胞菌BRZ-1在無菌操作下，接入100ml的搖瓶培養基中，在30℃，150轉/分的搖床中，培養24小時后備用；

(3)、種子罐發酵：將步驟(1)種子罐發酵培養基放入種子罐中，在種子罐內進行蒸汽高溫滅菌并冷卻后，按接種量5-10％接入步驟(2)的搖瓶菌種；開動攪拌機在轉速180轉/分，溫度30℃，通氣量4m³/h，罐壓0.1M?Pa，自然pH的條件下培養24小時后備用；

(4)、批量產品的制備方法如下：

(a)、地衣芽孢桿菌BFT-4采用固體發酵，將步驟(1)固體培養基滅菌并冷卻，按制備菌劑重量的2-4％的比例稱取步驟(3)種子罐液體菌種，按菌種與水1∶5的比例放入無菌水中，而后接入固體培養基中并混勻；移入培養室，料厚1.5-2厘米，室溫控制在30-35℃，培養72小時后在45-50℃的條件下烘干、粉碎、裝袋，備用，所獲地衣芽孢桿菌BFT-4制劑每克中活菌的含量不低于60億CFU；

(b)、施氏假單胞菌BRH和惡臭假單胞菌BRZ-1采用液體發酵，在發酵罐中裝入牛肉膏蛋白胨培養基，在發酵罐內進行蒸汽高溫滅菌并冷卻；將步驟(3)中種子液打入發酵罐中，接種量為發酵罐體積的8-10％，開動攪拌機在轉速110-220轉/分，溫度28-35℃，通氣量4m³/h，罐壓0.1-0.18M?Pa，自然pH的條件下培養24-32小時；單獨發酵后的發酵液加載體吸附，形成固體，備用，所獲施氏假單胞菌BRH和惡臭假單胞菌BRZ-1制劑每克中活菌的含量不低于60億CFU。

3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于：組合的微生物和復合酶按照待處理河道污染程度的不同復配為微生物-酶復合制劑，使得微生物的投加量為1-5g/m³，復合酶的投加量為0.01-0.05g/m³。