[發(fā)明專利]一種襯底表面生長蛋白纖維的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210091987.3
• 申請日: 2012-03-31
• 公開（公告）號: CN103360610A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張瑩瑩;周星飛;劉建華;李蓉;譚菊花;徐鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號: C08J3/00
• 分類號: C08J3/00;C08L89/00;B82Y40/00;B82Y5/00
• 代理公司: 寧波誠源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種襯底表面生長蛋白纖維的方法，具體是一種在云母襯底表面原位生長insulin蛋白纖維的方法。

背景技術(shù)

某些蛋白的聚集和纖維化與多種疾病密切相關(guān)，如帕金森癥、阿爾茲海默病等，但是蛋白聚集形成的纖維本身是一種很好的納米結(jié)構(gòu)材料，在未來的生物電子材料中有廣泛的應(yīng)用前景。譬如在無機(jī)材料表面用蛋白纖維為模板制備一維納米導(dǎo)線，這需要將事先生長好的纖維鋪在襯底上，也可以在襯底表面原位生長纖維。為此，我們發(fā)展了一種在云母襯底表面原位生長insulin蛋白纖維的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種襯底表面生長蛋白纖維的方法，以云母為襯底，在高濕環(huán)境下原位生長insulin蛋白纖維。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種襯底表面生長蛋白纖維的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)襯底制作：新剝離的云母剪成邊長為0.4～0.6cm的小方塊，用吸耳球?qū)⒃颇副砻娴乃樾即蹈蓛?，利用雙面膠把云母黏貼在光滑干凈的鐵片上備用；

2)Insulin樣品配制：用超凈水配制濃度為10～3000ug/ml，pH值為2～3的Insulin蛋白溶液備用；

3)纖維在云母上生長：取9～11μl配制好的Insulin樣品滴加在云母襯底上，使其均勻分布，然后在相對濕度24～26％，溫度23～25℃的恒濕恒溫箱下放置2.0～2.5h，待樣品表面上無水珠之后，將樣品放到真空烘箱中加熱20～30分鐘，加熱溫度是70-80度，接下來將加熱后的樣品放入高溫高濕水箱中進(jìn)行孵化形成蛋白纖維；

4)生長結(jié)束：樣品在高溫高濕水箱中培養(yǎng)1小時-3天后取出，即可在云母表面得到insulin蛋白纖維。

作為優(yōu)選，所述高溫高濕水箱的溫度在88～92度、濕度大于95％。

最后，所述高溫高濕水箱包括箱體，箱體內(nèi)裝有適量的水，在箱體內(nèi)的水面上設(shè)有一泡沫板，泡沫板上通過支架傾斜地設(shè)有一蓋板，所述樣品置于泡沫板上、位于蓋板的下方。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明以云母為襯底，通過高溫、高濕的環(huán)境下在云母表面原位生長insulin蛋白纖維，具有制備工藝簡單、操作方便的特點(diǎn)，可以根據(jù)需要通過控制insulin蛋白溶液的濃度來得到不同結(jié)構(gòu)的纖維，制得的蛋白纖維作為納米材料在未來的生物電子材料中有廣泛的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1a、1b、1c是溫度為90℃，相對濕度為95％時，不同濃度的牛胰島素在云母表面孵化70h后聚集纖維的AFM圖。(左)10ug/ml(中)100ug/ml(右)3000ug/ml。

圖2是實(shí)施例中高溫高濕水箱的結(jié)構(gòu)示意圖，1為水箱蓋子，2為支架，3為樣品，4為泡沫板，5為水。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

一種襯底表面生長蛋白纖維的方法，步驟為：

1、襯底制作：新剝離的云母剪成約0.5×0.5cm²的小方塊，用吸耳球?qū)⒃颇副砻娴乃樾即蹈蓛?，利用雙面膠把云母黏貼在光滑干凈的小鐵片上備用。

2、用超凈水配制濃度為10，100和3000ug/ml的insulin蛋白溶液，

3、分別在云母襯底表面滴加上10μl上述三種濃度分別是10，100和3000ug/ml的insulin蛋白溶液，使其均勻分布，然后在恒濕恒溫箱(相對濕度約25％，溫度24℃)下放置2h，待樣品表面上無水珠之后，將樣品放到真空烘箱中加熱30分鐘，加熱溫度是70-80度左右，這一步很關(guān)鍵，因?yàn)槿绻贿M(jìn)行加熱隨后直接把樣品從室溫放入90度水箱，溫差過大，水蒸氣會液化成水珠，造成樣品的毀壞，將加熱后的樣品放入90度濕度大于95％的水箱中培養(yǎng)70小時進(jìn)行孵化，由于在高濕度條件下，襯底表面會形成一層微納米級的水膜，蛋白分子在水膜中會擴(kuò)散遷移，形成蛋白纖維。生長結(jié)束后取出在空氣中自然晾干，可以在云母表面得到insulin蛋白纖維。

用原子力顯微鏡在輕敲模式下觀察其表面形貌，圖1就是三種濃度的牛胰島素蛋白在云母表面孵化70h后聚集纖維的AFM圖，我們可以看到，insulin蛋白在高濕度環(huán)境下經(jīng)過70小時生長后形成了蛋白纖維，不同濃度的蛋白經(jīng)過相同時間培養(yǎng)后呈現(xiàn)不同的結(jié)構(gòu)：(左)是濃度為10ug/ml形成無序短纖維結(jié)構(gòu)，(中)濃度100ug/ml形成沿云母晶格方向生長的纖維，(右)濃度3000ug/ml會出現(xiàn)隨即卷曲的結(jié)構(gòu)。