[發明專利]生產紅霉素的工程菌及其應用

有效

• 申請號: 201210091912.5
• 申請日: 2012-03-31
• 公開（公告）號: CN102604879A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 吳偉斌;黃欽耿;施巧琴;翁雪清;趙燕玉;黃祥峰;黃維錦;吳松剛
• 申請（專利權）人: 福建省麥丹生物集團有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/62;A61K31/7048;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生產紅霉素的工程菌及其應用。

背景技術

紅霉素是一類大環內酯類抗生素，廣泛應用于抑制革蘭氏陽性菌的感染。自1952年發現以來，紅霉素及其衍生物在臨床上得到了廣泛的應用。目前紅霉素類抗生素年銷售額超過35億美元，位居抗生素銷售額第三位，被認為是下一代治療耐藥性細菌的抗生素，隨第二代紅霉素(如阿奇霉素、羅紅霉素、克拉霉素等)、第三代紅霉素(如泰利霉素)在日本和歐洲上市，國內外市場對紅霉素的需求大大增加。

目前我國是世界最大的紅霉素原料生產國，但是主要還是依靠發酵生產，普遍存在紅霉素效價低的問題。國內提高紅霉素發酵效價主要是通過傳統的育種工作，如使用有效的化學或放射線隨機誘導菌種突變以提高菌株的抗生素產量，或者使用天然雜交或原牛質體融合技術從突變篩選系的分支處組合預期基因以得到高產量的菌株。傳統的育種方法存在一些局限性，如目標性差，篩選工作繁重，周期長等。

發明內容

本發明的目的是提供生產紅霉素的工程菌及其應用。

本發明保護將重組質粒導入紅色糖多孢菌得到的重組菌；所述重組質粒為將ermE*啟動子、eryBII蛋白的編碼基因和eryF蛋白的編碼基因插入出發載體的多克隆位點得到的重組質粒；所述重組質粒中由ermE*啟動子啟動所述eryBII蛋白的編碼基因和所述eryF蛋白的編碼基因的表達；所述紅色糖多孢菌的ATCC編號為11635；所述ermE*啟動子如序列表的序列1所示；所述eryBII蛋白如序列表的序列2所示；所述eryF蛋白如序列表的序列4所示。

所述eryBII蛋白的編碼基因可如序列表的序列3所示；所述eryF蛋白的編碼基因可如序列表的序列5所示。

所述重組質粒中，自上游至下游可依次包括所述ermE*啟動子、所述eryBII蛋白的編碼基因和所述eryF蛋白的編碼基因。

所述出發載體具體可為載體pSET152。

所述重組質粒具體可為將所述ermE*啟動子插入所述載體pSET152的XbaI酶切位點、所述eryBII蛋白的編碼基因插入所述載體pSET152的BamHI和EcoRI酶切位點之間、所述eryF蛋白的編碼基因插入所述載體pSET152的EcoRI酶切位點得到的重組質粒。

所述重組菌具體可為紅色糖多孢菌(Saccharopolyspora?erythraea)MFSE0015。紅色糖多孢菌(Saccharopolyspora?erythraea)MFSE0015簡稱紅色糖多孢菌MFSE0015，已于2012年3月2日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC；地址：中國武漢，武漢大學；郵編：430072)，保藏編號為CCTCC?NO：M?2012052。

以上任一所述重組菌均可用于生產紅霉素。

本發明還保護一種生產紅霉素的方法，包括如下步驟：將以上任一所述的重組菌進行發酵，得到紅霉素。

所述發酵的條件可為33.5℃、振蕩培養6天。所述發酵采用的發酵培養基具體如下：由溶質和水組成；每50ml發酵培養基含如下溶質：35g玉米淀粉、30g黃豆餅粉、30g糊精、0.6ml正丙醇、2g硫酸銨、12ml豆油和6g碳酸鈣。所述發酵培養基的pH具體可為7。

所述重組菌具體可以以種子液的方式接種至所述發酵培養基。所述種子液是將所述重組菌接種至種子培養基進行培養得到的。所述種子液與所述發酵培養基的體積配比具體可為1∶10。所述培養的條件可為33.5℃、振蕩培養2天。所述種子培養基由溶質和水組成；每50ml種子培養基含如下溶質：50g玉米淀粉、15g黃豆餅粉、12ml玉米漿、1.5g氯化鈉、1.5g硫酸銨、7ml豆油和6g碳酸鈣。所述種子培養基的pH具體可為7。

以上任一所述重組菌均可用于生產微生物抑制劑。所述微生物可為短小芽孢桿菌，具體可為CMCC編號為63202的短小芽孢桿菌。

本發明還保護一種生產微生物抑制劑的方法，包括如下步驟：將以上任一所述的重組菌進行發酵，得到微生物抑制劑。

所述發酵的條件可為33.5℃、振蕩培養6天。所述發酵采用的發酵培養基具體如下：由溶質和水組成；每50ml發酵培養基含如下溶質：35g玉米淀粉、30g黃豆餅粉、30g糊精、0.6ml正丙醇、2g硫酸銨、12ml豆油和6g碳酸鈣。所述發酵培養基的pH具體可為7。