[發(fā)明專利]6-(甲巰基)嘌呤的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210089892.8
• 申請日: 2012-03-30
• 公開（公告）號: CN102621323A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設計）人: 虞留明;田軍;袁紅霞;蔡江麗
• 申請（專利權）人: 蘇州博源醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/53;G01N33/535;C07K16/06;C07K14/765;C07K14/795;C07K14/435
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1.一種6-(甲巰基)嘌呤的均相酶免疫檢測方法(Homogeneous?Immunoassay)，使用6-(甲巰基)嘌呤的均相酶免疫檢驗試劑，該檢測試劑由抗6-(甲巰基)嘌呤(6-MMP)特異性抗體和6-(甲巰基)嘌呤酶標偶聯(lián)物組成，包括以下操作步驟：

(1)采用全自動生化分析儀，將待測樣本與6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑分別放入樣本倉和試劑倉；

(2)按照下表進行檢測項目參數(shù)設置；

(3)測定OD340nm的吸光值；

(4)制作標準曲線來定量樣本中的6-(甲巰基)嘌呤濃度；

上述操作步驟(2)還可以通過以下優(yōu)選方案實現(xiàn)。

所述抗6-MMP特異性抗體由6-MMP免疫原免疫動物后生產(chǎn)得到，

所述的6-MMP免疫原，其結構式如式(Ⅰ)所示：

式中，R為連接基團，載體具有免疫原性。

R為-(CH₂)_n-COO-、-O-(CH₂)_n-COO-、-S-(CH₂)_n-COO-或-NH-(CH₂)_n-COO-等，n是1至20之間的整數(shù)。優(yōu)選R為-(CH₂)_n-COO-，n值為1至10。更優(yōu)選R為-(CH₂)₅-COO-；所述載體為具有免疫原性的物質(zhì)，常選用蛋白質(zhì)。優(yōu)選為血清蛋白，血藍蛋白和甲狀腺球蛋白，更優(yōu)選為牛血清蛋白，

6-MMP酶標偶聯(lián)物的制備方法如下：

(1)酶溶液制備：稱取酶，選自β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)或葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphate?Dehydrogenase，G6PDH)，優(yōu)選G6PDH，在室溫條件下溶解于磷酸緩沖液中，終濃度為2-6mg/mL；

(2)用有機溶劑溶解鏈接R連接基團的6-MMP衍生物，使其終濃度為10-50mg/mL，通過三丁胺法進行活化，并與酶溶液進行交聯(lián)反應，經(jīng)純化和透析后得到6-MMP酶標偶聯(lián)物，所述的有機溶劑選自DMF、DMSO、甲醇或乙醇，優(yōu)選地，有機溶劑為DMF。

2.根據(jù)權利要求1所述的6-(甲巰基)嘌呤的均相酶免疫檢測方法，其特征在于所述的檢測試劑制備方法包含以下步驟：

(1)將抗6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體以1∶1000-1∶10000的體積比稀釋到均相R1緩沖液中，均相R1緩沖液含50mM?Tris，0.25％牛血清蛋白，50mM葡萄糖-6-磷酸和50mM煙堿腺嘌呤二核苷酸；

(2)將6-(甲巰基)嘌呤酶標偶聯(lián)物以1∶1000-1∶10000的體積比稀釋到R2緩沖液中，R2緩沖液含100mM?Tris，0.25％牛血清蛋白；

所述的抗6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體與R1緩沖液的體積比優(yōu)選為1∶1000-1∶3000；

所述的6-(甲巰基)嘌呤酶標偶聯(lián)物與R2緩沖液的體積比優(yōu)選為1∶1000-1∶3000。