[發(fā)明專利]一種三聯(lián)免疫膠體金速測卡及其制備、使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210089130.8
• 申請日: 2012-03-30
• 公開（公告）號: CN102967707A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 武愛波;范峰;劉木林;毛愛民;楊文杰;劉剛;陶海強(qiáng);徐偉;鐘國良
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫福陽生物科技有限公司;無錫市動物疫病預(yù)防控制中心
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物工程技術(shù)領(lǐng)域的速測卡及其使用方法，具體是一種同時檢測瘦肉精(鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇)的三聯(lián)免疫膠體金速測卡及其使用方法。?

背景技術(shù)

鹽酸克倫特羅(Clenbuterol)、萊克多巴胺(Ractopamine)、沙丁胺醇(Salbutamol)等β-腎上腺素受體激動劑由于能促進(jìn)畜禽的生長，而后曾用于畜禽飼料添加劑，因?yàn)樾笄菔秤煤笤诖x過程中能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成以及脂肪的降解，提高畜禽的瘦肉率。20世紀(jì)90年代，我國錯誤地將其作為科研成果開始以飼料添加劑引人并推廣，被俗稱為“瘦肉精”。該藥易在畜禽體內(nèi)特別是內(nèi)臟中殘留，特別是肺、肝、腎等內(nèi)臟里，并通過食物鏈進(jìn)入人體，其累積性殘留隨劑量和時間而增大；而且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，加熱到172℃時才分解。因此，一般的烹調(diào)加熱方法不能將其破壞掉。人食用含“瘦肉精”殘留量高的肉制品和內(nèi)臟后，就會引起中毒，出現(xiàn)全身肌肉顫抖、頭暈、嘔吐等中毒癥狀，嚴(yán)重危害人類健康，特別對于患有高血壓、心臟病的人來說危險性就更大，直接危及生命安全。?

特別地，自從2011“雙匯瘦肉精”事件爆發(fā)以來，全國范圍內(nèi)的豬肉制品都受到了不同程度地沖擊，這不僅損害了消費(fèi)者的權(quán)益，擾亂了社會的公信度，對我國食品安全整體形象也造成了極其惡劣的影響。?

目前，市場上檢出的“瘦肉精”類違禁藥物殘留主要為鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇以及三種物質(zhì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國2010年生豬存欄量為4.8億頭左?右，出欄量為一億頭左右。對如此龐大數(shù)目的生豬養(yǎng)殖場、屠宰場等進(jìn)行“瘦肉精”檢測成了一項(xiàng)浩大的工程。一般常規(guī)的金標(biāo)卡僅僅能一次檢測一種“瘦肉精”類型，這嚴(yán)重阻礙了基層食品安全檢測部門的大范圍篩查。本發(fā)明提供了一種快速、現(xiàn)場、靈敏的檢測三種主要“瘦肉精”違禁藥物殘留的方法，可以在同一條檢測卡上同時檢測鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇，為“瘦肉精”類違禁藥物殘留的快速篩查提供了一種低成本、高效的途徑。?

以側(cè)向流動為檢測原理的金標(biāo)卡檢測方法已在我國畜禽產(chǎn)品檢測實(shí)踐中廣泛應(yīng)用。但未見針對同時檢測鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等的快速檢測試紙條的公開報道。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種制備同時檢測鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺以及沙丁胺醇的金標(biāo)卡檢測方法，并應(yīng)用其針對尿樣、組織類等樣品中“瘦肉精”類違禁藥物殘留的快速、現(xiàn)場和靈敏的檢測。?

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明的制備方法包括以下步驟：?

1)在上層的塑料板有兩個的孔，分別為加樣孔和觀察孔，加樣孔大小為3mm×7mm，觀察孔大小為4mm×18mm。?

2)在塑料板下方從加樣孔往上依次為并排粘貼的玻璃纖維膜和的固定有膠體金標(biāo)記抗體的試紙條、NC膜、吸收墊。玻璃纖維膜大小為4mm×15mm；金標(biāo)記抗體試紙條大小為3mm×4mm；NC膜大小為4mm×28mm；吸收墊大小為4mm×19mm。?

3)金標(biāo)墊上每種單克隆抗體的量為5ng-50ng；NC膜上抗原-BSA的量為0.4μg-1.2μg。?

4)試紙條干燥溫度為37℃，時間為30min。?

本發(fā)明上述方法制備的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇三聯(lián)速測卡，實(shí)際豬尿和飼料樣品以及肉樣的快速檢測具體步驟如下：首先于加樣孔中加入50μL樣品溶液并水平放置。樣品溶液會沿樣品墊滲透至膠體金標(biāo)記抗體的試紙條，并與NC膜上的特異性抗原競爭結(jié)合試紙條上固定的特異性單克隆抗體。8-10min后，于結(jié)果觀察孔中觀察顏色變化，作出判斷。?

結(jié)果判斷：完全陰性結(jié)果(出現(xiàn)1條C線+3條CLE/SAL/RAC的T線；陽性(+)：只要任何一條鹽酸克倫特羅CLE/萊克多巴胺RAC/沙丁胺醇SAL的T線顯色不明顯或無顯色。?

本發(fā)明制得的新型瘦肉精三聯(lián)速測卡對豬肉制品、飼料樣品以及尿樣中的復(fù)雜基質(zhì)具有較好的抗干擾效果，可廣泛應(yīng)用于三種“瘦肉精”違禁藥物殘留的快速檢測。較現(xiàn)有的速測卡操作相此，具有以下特有優(yōu)勢。?

(1)同一張卡上能同時檢測克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇三種“瘦肉精”類殘留，而不是三張單種卡的簡單物理性膠連，加樣僅需1次，而且反應(yīng)均在同一條件下進(jìn)行。?

(2)樣品前處理完全統(tǒng)一(克服了組織類樣品檢測中的不同處理方法)，操作簡單，50微升樣品加樣量即可。通常地，克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇單種卡在檢測組織類樣本時，樣品前處理的程序是不一樣的；如單種依次處理，存在時間長、操作繁瑣等缺陷。?