[發(fā)明專利]檢測(cè)3-甲基喹噁啉-2-羧酸的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210089054.0
• 申請(qǐng)日: 2012-03-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102621322A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江海洋;王世恩;王照鵬;何丹婷;李淑芳;潘靜茹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京維德維康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)3-甲基喹噁啉-2-羧酸的試劑盒。

背景技術(shù)

3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)是喹乙醇、乙酰甲喹和喹烯酮在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的代謝物。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)喹噁啉類原形藥物及代謝物存在著明顯的安全性問(wèn)題，具有明顯的致畸、致癌、致突變、光敏和腎上腺皮質(zhì)損害等毒副作用，嚴(yán)重危害了人和動(dòng)物的健康。國(guó)際上有關(guān)喹噁啉類藥物的最高殘留限量規(guī)定非常嚴(yán)格。歐盟規(guī)定卡巴氧和喹乙醇以及其代謝產(chǎn)物在動(dòng)物性食品中不得檢出而且規(guī)定這兩種獸藥禁止銷售。我國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)規(guī)定，喹乙醇最高殘留限量為喹乙醇+3-甲基喹噁啉-2-羧酸：4ug/kg(肌肉)，50ug/kg(肝臟)，2mg/kg(飼料)。

目前國(guó)內(nèi)外研究主要有色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)和免疫分析技術(shù)等。TLC法的特異性較差，靈敏度也相對(duì)較差，所需標(biāo)準(zhǔn)品濃度較高，潛在的污染性較高，HPLC法所需儀器設(shè)備投資大，操作技術(shù)要求高，凈化柱消耗較多，檢測(cè)成本較高，免疫親和柱特異性較好，但需結(jié)合HPLC儀和熒光光度計(jì)才能定量檢測(cè)，檢測(cè)技術(shù)要求和成本較高，而ELISA法相比而言，操作簡(jiǎn)便，快捷，污染較小，靈敏度也較高，適合批量樣品的普檢和篩選，特別是研制成功的試劑盒，給檢測(cè)人員帶來(lái)很大的方便，同時(shí)，也節(jié)省了成本，符合目前國(guó)際上檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展方向。免疫膠體金層析技術(shù)不需任何儀器設(shè)備和試劑，特別適合于基層單位大批量時(shí)間緊的檢測(cè)和大面積普查，因此酶免疫法在飼料安全分析中應(yīng)用廣泛。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)3-甲基喹噁啉-2-羧酸的試劑盒。

本發(fā)明提供的檢測(cè)3-甲基喹噁啉-2-羧酸的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括抗喹乙醇代謝物單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞5A2分泌的單克隆抗體。所述抗喹乙醇代謝物單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞5A2(簡(jiǎn)稱雜交瘤細(xì)胞5A2)已于2012年2月15日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào))，保藏號(hào)為CGMCC?No.5778。

所述試劑盒可為如下1)至4)中的任意一種：

1)包括式(I)所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)物、所述單克隆抗體和酶標(biāo)記抗抗體的試劑盒；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；

2)包括式(I)所示化合物的酶標(biāo)記物、所述單克隆抗體和抗抗體的試劑盒；其中，所述抗抗體作為包被原；

3)包括式(I)所示化合物的酶標(biāo)記物和所述單克隆抗體的試劑盒；其中，所述單克隆抗體作為包被原；

4)包括式(I)所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)物和所述單克隆抗體的酶標(biāo)記物的試劑盒；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原。

式(I)。

所述載體蛋白可為卵清蛋白(OVA)或牛血清白蛋白(BSA)。

所述偶聯(lián)物中，式(I)所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)比具體可為(11-8)∶1。所述偶聯(lián)比指的是摩爾比。式(I)所示化合物與所述載體蛋白具體可通過(guò)活性酯法偶聯(lián)。所述偶聯(lián)物具體可如式(II)所示。

式(II)。

所述試劑盒還包括洗滌液、樣品濃縮液、底物顯色液和終止液中的至少一種。

每1升洗滌液可按照如下方法配制得到：將10ml吐溫20、5g疊氮化鈉和990ml磷酸鹽緩沖液混合，得到洗滌液。所述磷酸鹽緩沖液可為pH7.2-7.6、0.005M-0.015M的磷酸鹽緩沖液，具體可為的濃度可為pH7.4、0.01M)的磷酸鈉緩沖液。

所述樣品濃縮液可為濃度為0.03mol/L-0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液，優(yōu)選為pH7.4、0.04mol/L的PBS緩沖液。

所述底物顯色液包括顯色液A和顯色液B，可為獨(dú)立包裝的顯色液A和顯色液B，也可直接將顯色液A和顯色液B等體積混合得到。所述顯色液可為過(guò)氧化氫溶液或過(guò)氧化脲溶液；所述顯色液B可為鄰苯二胺(OPD)溶液或四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液。所述顯色液A具體可為2％(g/100ml)過(guò)氧化脲水溶液。所述顯色液B具體可為1％(g/100ml)四甲基聯(lián)苯胺水溶液。

所述終止液具體可為0.2M硫酸水溶液。

以上任一所述試劑盒均可用于檢測(cè)喹乙醇代謝物(如3-甲基喹噁啉-2羧酸或喹噁啉-2羧酸)。

以上任一所述試劑盒均可用于檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有喹乙醇代謝物(如3-甲基喹噁啉-2羧酸或喹噁啉-2羧酸)。