[發明專利]葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質體及制備方法

有效

• 申請號: 201210088800.4
• 申請日: 2012-03-30
• 公開（公告）號: CN102579353A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 滕利榮;楊東生;楊明智;吳麗艷;金元寶;王艷珍;王立英;張瑤;王貞佐;劉丹平
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/34;C07D475/04;A61P35/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質體，其特征在于結構如下所述：PEG兩端分別連接葉酸和包有親水性抗癌藥物的脂質體。

2.如權利要求1所述葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質體的制備方法，包括以下步驟：

1）葉酸活化酯的制備：按照（165～175）：（65～75）：（300～350）：（1650～1750）：（1～5）的摩爾比先后將葉酸、無水二甲基亞砜、二環己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺及三乙胺混合在一起，在室溫條件下反應12-15小時，過濾除去二環己基脲，得到葉酸活化酯溶液，反應式如下：

2）葉酸-PEG的合成：將NH₂-PEG-COOH溶于DMSO，NH₂-PEG-COOH與上述葉酸活化酯摩爾比為1∶（9～8），在氮氣的保護下，NH₂-PEG-COOH溶液與葉酸活化酯反應5?h，于4℃條件下，將所得產物在DMSO中透析72～75h,然后在超純水中透析48~55h，將最終產品在－20℃冷凍干燥；

3）復乳法制備葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質體：

初乳的制備：將質量比為（10~30）：（1~4）：（7~25）：（1~3）的大豆卵磷脂、膽固醇、二棕櫚酰磷脂酰甘油、三油酸甘油酯混合，每100g?大豆卵磷脂加入2mL三氯甲烷-乙醚（1：1）混合溶劑中使其完全溶解，該溶液作為有機相；配制2ml含水溶性抗癌藥物和精氨酸的水溶液作為內水相，該水溶液中抗癌藥物濃度為15?g·L^-1，精氨酸濃度為5.6?g·L^-1，pH為4.6,將內水相緩慢滴入有機相中,渦旋振蕩并探針超聲5min,得到乳白色半透明狀的W?/O的初乳；

復乳的制備：將W?/O的初乳滴入4倍于三氯甲烷-乙醚（1：1）體積的水溶液中，該溶液中精氨酸濃度為5.5?g·L^-1，葡萄糖的濃度為5.5%，pH為4.6；渦旋振蕩后，超聲5?min得W?/O/W的復乳；在55℃下，向制得的W?/O/W復乳中通入氮氣，揮去有機相，得多囊泡脂質體的混懸液；

脂質體與葉酸的連接：將多囊泡脂質體加到10%?葉酸-PEG溶液中，二者體積比為1：（2～3）；靜置35min，用3?000?r·min^-1離心40?min，傾去上清液，得到PEG2000修飾的多囊泡脂質體，再用pH為4.6、濃度為5.5?g·L^-1的精氨酸溶液調整水溶性抗癌藥物質量濃度至5.5?g·L^-1，即得。

3.?如權利要求1所述的葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質體，其特征在于制備方法包括以下步驟：

1）葉酸活化酯的制備：將葉酸與N-羥基丁二酰胺形成活化酯，即首先將葉酸溶于二甲基亞砜中，再按照葉酸、N-羥基丁二酰胺、二環己基碳二亞胺的摩爾比為1∶2∶2的比率混合，在攪拌條件下反應20?h，該反應在氮氣保護的條件下進行；將所得混懸物10?000?r/min離心40?min，除去白色不溶物，取黃色上清液；

2）葉酸-PEG的合成：將NH₂-PEG-COOH溶于DMSO，NH₂-PEG-COOH與上述葉酸活化酯摩爾比為1∶（9～8），在氮氣的保護下，NH₂-PEG-COOH溶液與葉酸活化酯反應5?h，于4℃條件下，將所得產物在DMSO中透析72～75h，然后在超純水中透析48~55h，將最終產品在－20℃冷凍干燥；

3）復乳法制備葉酸靶向的抗癌藥物脂質體：緩慢將40g/L的水溶性抗癌藥物溶液（用0.1mol/L?HCl調節pH值為1.2）加至等體積的氯仿溶液中，該氯仿溶液中含有質量比為（10~15）：（1.25～5）：（7.5～10）：（1～3）的大豆卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰甘油、膽固醇和三油酸甘油酯；以10000×g高速剪切5min制成W/O型初乳；吸取該初乳注入5倍體積的含有5%葡萄糖注射液和40mmol/L賴氨酸游離堿的混合溶液的外水相中，以4000×g剪切25s形成W/O/W型復乳；

4）抗癌藥物與葉酸的連接：在55℃下，向制得的W?/O/W的復乳中通入氮氣，揮去有機相，得多囊泡脂質體的混懸液，將所得多囊泡脂質體加到10%葉酸-PEG溶液，二者體積比為1：（3～2），靜置35min，使多囊泡脂質體與葉酸-PEG溶液結合，以4?000?r·min^-1離心30?min，傾去上清液，得到葉酸連接的多囊泡脂質體，再用pH為4.6、濃度為5.5?g·L^-1的精氨酸溶液調整抗癌藥物質量濃度至5.5?g·L^-1，即得。