[發明專利]一種基于卡介菌多糖核酸的新型疫苗佐劑及其用途

無效

• 申請號: 201210088424.9
• 申請日: 2012-03-30
• 公開（公告）號: CN103357008A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 劉念
• 申請（專利權）人: 湖南斯奇生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/04;A61K39/135;A61K39/145;A61K39/00;A61P31/14;A61P31/16;A61P31/06;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及疫苗佐劑，具體涉及來自卡介菌多糖核酸組分，可用于治療和預防用疫苗中的佐劑。?

背景技術

佐劑是一種非特異性免疫增強物質，當與抗原一起注射或預先注入機體時，可增強機體對抗原的免疫應答或改變免疫應答類型。目前常用疫苗佐劑有氫氧化鋁佐劑、短小棒狀桿菌、脂多糖、細胞因子、明礬等。但是以上這些佐劑對細胞免疫作用不明顯，尤其是對以細胞免疫為主的疫苗，如對高純化的第二代重組疫苗和第三代DNA疫苗，效果甚微。現有以上這些佐劑在臨床上的應用已經滿足不了現代疫苗技術發展的需求。?

已有文獻報道卡介菌多糖核酸，能刺激天然免疫，促進對機體細胞特異的細胞或體液免疫作用。但采用卡介菌多糖核酸做為疫苗佐劑還沒有報道。?

發明內容

本發明的目的是提供一種來源于卡介菌提取物的多糖核酸疫苗佐劑及其應用，該佐劑本身具有免疫活性，與疫苗中的抗原在體內作用能誘導Th1型為主的免疫應答。?

一種疫苗佐劑，其主要成分是從卡介菌中提取的多糖和核酸，還含有殘留的卡介菌菌體蛋白和質量百分含量小于10％的水分。?

所述的疫苗佐劑，其中所述的多糖的質量百分比為70％-80％。?

所述的疫苗佐劑，其中所述的核酸的質量百分比為10％-20％。?

本發明所述的疫苗佐劑在制備治療和預防用疫苗佐劑中的應用。?

本發明的另一目的，是提供上述疫苗佐劑和抗原所制的疫苗。?

一種疫苗，其含有所述佐劑和抗原，其中抗原和佐劑比例為：1∶1-15∶1。所述的抗原為牛分枝桿菌減毒株、新城疫Lasota株、流腦病毒滅活株、偽狂犬病毒滅活株或人源VEGF因子。?

本發明所述疫苗為卡介苗、口蹄疫滅活疫苗、流感疫苗、偽狂犬病毒滅活疫苗或抗腫瘤疫苗。?

本發明以卡介菌多糖核酸作為疫苗佐劑，研制出了新型的疫苗佐劑。通過大量試驗證實，該新型佐劑本身具有免疫活性，證實了其作為佐劑誘導的免疫反應為Th1型，機體產生抗體類?型以IgG2a為主。本發明所述佐劑結合疫苗使用后，能誘導體液免疫，也能誘導細胞免疫，從而發揮和加強疫苗的預防作用及治療作用。?

本發明所述的卡介菌多糖核酸疫苗佐劑，一個重要特點就是來源于天然產物的疫苗佐劑。該疫苗佐劑包含多糖、核酸、殘留的卡介菌菌體蛋白和質量百分含量小于10％的水分，其中多糖質量百分含量為70-78％，核酸質量百分含量為12-20％，殘留的卡介菌菌體蛋白質量百分含量為0-0.5％，苯酚的殘留量為零，雜菌數為0-20個/克。?

本發明提供的卡介菌提取產物多糖核酸，一個重要特點就是來自天然產物，其多糖含量、核酸含量可以通過紫外檢測而獲得。在卡介菌多糖中，構成主鏈的為1→6鍵型Glc。存在的1→4，6鍵型Glc，分支點殘基為Glc(1→4，6)，為0.21，即每十個己糖殘基中有兩個分支，非還原性末端殘基是1→Glc。?

通過體外實驗和體內實驗，對卡介菌多糖核酸作為疫苗佐劑的藥效學、作用機制進行了研究。?

本發明的意義在于將卡介菌多糖核酸作為佐劑用于疫苗中，該佐劑可以與抗原協同作用，提高疫苗的藥用效能。?

附圖說明

圖1：肌肉注射各組對哮喘小鼠Penh/NS(％)的影響：?

圖2：肌肉注射各組對哮喘小鼠PC100(mg/ml)的影響：?

圖3：TES、DNA、BCG，3組腫瘤大小情況；?

圖4：卡介菌多糖核酸佐劑的制備工藝流程圖。?

具體實施方式

通過以下具體實施例和實驗結果詳細介紹本發明的創新和應用意義，幫助閱讀者更好的理解本發明，但不構成對本發明實施范圍的限定。?

實施例一：卡介菌多糖核酸疫苗佐劑的制備?

1、工藝流程圖?

工藝流程圖見附圖4?

2、生產工藝過程?

2.1菌種部分?

2.1.1、工作種子批的來源：?

由中國醫學細菌菌種保藏管理中心分支桿菌專業實驗室制備并提供，菌種為D2PB302SII甲10，保存于-40℃以下超低溫冰箱中。?

2.1.2、工作種子批的接種：?

用滅菌后的注射器從工作種子批試管中抽出0.2-0.3ml注入培養基上，然后置于37-39℃恒溫室培養30天左右，即第一代菌種培養成功。?

2.1.3、保種：?