[發明專利]辛酸純化處理的抗毒素血清制備方法

無效

• 申請號: 201210088391.8
• 申請日: 2012-03-30
• 公開（公告）號: CN102526728A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 季沖;姚曉東;鄧大義;敬偉
• 申請（專利權）人: 江西生物制品研究所
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;C07K16/06;C07K16/10;C07K16/14;C07K16/18;A61P31/04;A61P31/14;A61P39/02
• 代理公司: 江西省專利事務所 36100
• 代理人: 黃新平

技術領域

本發明涉及一種辛酸純化處理的抗毒素血清制備方法。

背景技術

抗毒素血清，可稱為抗毒素、也稱為抗血清，是由相應毒素或類毒素、細菌、病毒免疫動物（主要為馬屬動物）所得的免疫血漿（血清），經胃蛋白酶消化、硫酸銨鹽析制得的免疫球蛋白制劑，其制備方法為《中國生物制品規程》及《中國藥典》公開的技術。目前，抗毒素血清的制備方法一般包括以下步驟：1、胃蛋白酶消化，用純化水或注射用水將各種免疫血漿（血清）稀釋，并用胃蛋白酶進行消化處理得到消化液；2、第一次沉淀及加溫變性處理，消化液中加入硫酸銨，并調節pH值，然后將消化液加溫并保持，再降溫，過濾收集上清液，廢棄沉淀物；3、第二次沉淀處理，即在上述上清液中加入硫酸銨，靜置后過濾取沉淀物，廢棄上清液；4、明礬沉淀處理，將上述沉淀物稀釋，加入明礬溶液，靜置后過濾取上清液，廢棄沉淀物；5、超濾濃縮處理，將上述上清液進行超濾脫鹽并濃縮；6、原液配制，在超濾濃縮液中添加氯化鈉、防腐劑，調節pH，除菌過濾，即制得抗毒素血清原液。

該工藝的不足之處是，制備的抗毒素血清制品F（ab）2的含量及比活（單位/克蛋白）較低，在臨床應用時過敏反應發生率和血清病的發生率較高。

發明內容

本發明的目的就是提供一種辛酸純化處理的抗毒素血清制備方法，該制備方法能提高抗毒素血清制品的F（ab）2的含量及比活純度（單位/克蛋白），減少抗毒素血清制品臨床應用時的過敏反應發生率和血清病的發生率。

本發明的辛酸純化處理的抗毒素血清制備方法，包括以下步驟：

1、胃蛋白酶消化，使用現有常規工藝；

2、第一次沉淀及加溫變性處理，消化結束后，按每100ml消化液加入10-20g的硫酸銨，調節pH至5.20-5.60，加溫至58±1℃，保溫30分鐘。保溫完畢，降溫至45℃以下，按100ml消化液加入0.5-0.8g硅藻土,攪拌均勻后,將消化液泵入板框式壓濾機進行過濾分離，過濾收集上清液，廢棄沉淀物，再將上清液，按0.5-8.0%的體積比例加入辛酸液，調節pH至4.00-7.00，攪拌時間0.5-4.0小時，處理完畢，按100ml溶液加入0.5-0.8g硅藻土,攪拌均勻后,將消化液泵入板框式壓濾機進行過濾分離，過濾收集上清液，廢棄沉淀物，所述的PH值調節，使用的調節劑為1-2M的氫氧化鈉、鹽酸；

3、第二次沉淀處理，使用現有常規工藝；

4、明礬沉淀處理，使用現有常規工藝；

5、超濾濃縮處理，使用現有常規工藝；

6、原液配制，使用現有常規工藝。

上述辛酸純化抗毒素血清的原理是：經過胃酶消化和硫酸銨處理后的過濾上清液，在酸性條件下，一些殘留的非IgG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig等)能被辛酸等短鏈脂肪酸沉淀；而上清中剩余的蛋白主要為IgG及其片段。由于減少了雜蛋白的含量，因而可獲得純度較高的抗毒素血清。

所述的抗毒素血清包括破傷風抗毒素、白喉抗毒素、氣性壞疽抗毒素、肉毒抗毒素、抗狂犬病血清、各類抗蛇毒血清的液體制劑和凍干制劑。

所述的各種動物免疫血漿（血清）包括以下動物來源：馬、騾、驢、豬、羊、牛、兔、駱駝。

本發明的辛酸純化處理的抗毒素血清制備方法，在制備工藝中增加了辛酸純化的步驟，使抗毒素血清產品質量指標更高，使用更安全，與原有制備工藝相比，抗毒素血清產品的主要質量指標中，F（ab）2的含量從50-60%提高到80%以上，產品的比活純度（單位/克蛋白）從35000-45000提高到78000以上，使抗毒素血清制品臨床應用時的過敏反應發生率和血清病的發生率減少30%-40%。所添加的辛酸，可以利用超濾濃縮工藝去除，并可按照《中國藥典》（2010年版）規定的要求進行殘留測定。

具體實施方式

一種辛酸純化處理的抗毒素血清制備方法，包含下述步驟：

1、胃蛋白酶消化，將檢定合格的免疫血漿，按血漿量的2-4倍加入純化水稀釋，調pH至2.90-3.50，根據稀釋液總量按每ml稀釋液加入3-10個活力單位的胃酶，加0.2%(ml/ml)?甲苯（或不加），控制消化液溫度于30±1℃，消化1-1.5小時；???????????????