[發明專利]β-葡聚糖在制備人樹突狀細胞腫瘤疫苗中的應用

有效

• 申請號: 201210088329.9
• 申請日: 2012-03-29
• 公開（公告）號: CN102600467A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 戚春建;寧永玲;王仕忠;錢科卿
• 申請（專利權）人: 戚春建
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K39/00;C12N5/0784;A61P35/00
• 代理公司: 常州市江海陽光知識產權代理有限公司 32214
• 代理人: 孫曉暉

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種β-葡聚糖在制備人樹突狀細胞腫瘤疫苗中的應用。

背景技術

樹突狀細胞（Dendritic?cells，簡稱DC）大約占血液中整個細胞群體的0.3%，是一種專職抗原遞呈細胞，它能夠激發和調控機體的免疫應答。樹突狀細胞的以下幾個特點使得它能夠有效的遞呈抗原激發機體的免疫應答：（1）能夠通過吞噬作用、胞飲作用和受體介導的內吞作用而高效的捕捉抗原（如凋亡和壞死的細胞微生物及可溶性的外源蛋白等）；（2）具有強的運動性，能夠將捕捉到的抗原從外周組織轉運到初級和次級淋巴器官；（3）能夠高水平表達MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ分子，與細胞內加工形成的抗原決定簇形成復合體并表達于樹突狀細胞表面為激活抗原特異的淋巴細胞提供必需的第一信號；（4）能夠高水平表達共刺激分子及粘附分子，為激活抗原特異的T淋巴細胞提供必需的第二信號；（5）能夠合成重要的細胞因子（如IL-12和IFN-γ等），激活多種免疫相關細胞。所以樹突狀細胞是最有效的抗原遞呈細胞，其抗原遞呈能力遠遠強于其他的抗原遞呈細胞（如B細胞和巨噬細胞）。

腫瘤免疫治療是放療、化療和手術治療之外的另一種治療腫瘤的方法，雖然目前這種方法還只處于Ⅰ期和Ⅱ期臨床研究階段，但它已被公認為是最具前景的腫瘤治療方法。腫瘤免疫治療的關鍵是通過激活機體的免疫系統來清除腫瘤細胞，其中關鍵的是產生腫瘤特異的細胞毒性T淋巴細胞（CTLs）。廣泛的研究表明：有效的抗腫瘤CTLs應答需要專職抗原遞呈細胞——樹突狀細胞來激活T淋巴細胞。樹突狀細胞在激活抗原特異T淋巴細胞及維持T淋巴細胞活性上具有重要作用。目前樹突狀細胞腫瘤疫苗正在被迅速、廣泛的研究，并且已在動物實驗和早期的臨床實驗中取得了很有意義的結果。這些研究結果表明：樹突狀細胞腫瘤疫苗不僅能夠誘發針對原發腫瘤的免疫應答，而且也能夠誘發針對轉移腫瘤的免疫應答。

β-葡聚糖是存在于許多植物和微生物中的一種多糖，包括燕麥、大麥、蘑菇、海藻、細菌和酵母菌等，β-葡聚糖作為生物應答調節劑（BRMs），體內外的研究表明，可溶性、低分子量的β-葡聚糖，可結合于CR3（CR11b/CD18）受體。目前尚未發現用β-葡聚糖制備人樹突狀細胞腫瘤疫苗的文獻報道。

發明內容

本發明的目的在于解決上述問題，提供一種β-葡聚糖在制備人樹突狀細胞腫瘤疫苗中的應用。

實現本發明上述目的的技術方案是：β-葡聚糖在制備人樹突狀細胞腫瘤疫苗中的應用。

該應用具有以下步驟：①用含有GM-CSF和IL-4的培養基培養人外周血單核細胞，獲得未成熟人樹突狀細胞；②用β-葡聚糖誘導腫瘤抗原負載到步驟①獲得的未成熟人樹突狀細胞內，獲得人樹突細胞腫瘤疫苗。

上述步驟②中所述的β-葡聚糖的濃度為80μg/mL～120μg/mL。

上述步驟①中所述的含有GM-CSF和IL-4的培養基中，GM-CSF的濃度為80ng/mL～120?ng/mL，IL-4的濃度為30ng/mL～70ng/mL。

上述步驟①中所述的人外周血單核細胞為CD14⁺外周血單核細胞，它是由血細胞分離機從人外周血中先分離獲得外周血單個核細胞，再通過磁珠分選系統從外周血單個核細胞中分選獲得。

上述步驟①中所述的未成熟人樹突狀細胞為培養100h～140h獲得的。

上述步驟②中所述的腫瘤抗原是通過生物法和/或物理法誘導腫瘤細胞凋亡而獲得。即可以單獨通過生物法誘導腫瘤細胞凋亡，也可以單獨通過物理法誘導腫瘤細胞凋亡，還可以先通過生物法再通過物理法誘導腫瘤細胞凋亡。所述的生物法是采用抗腫瘤化療藥物處理腫瘤細胞使之凋亡。所述物理法是采用同位素射線照射腫瘤細胞使之凋亡，或者采用紫外線照射腫瘤細胞使之凋亡，或者對腫瘤細胞進行反復凍融使之凋亡。

上述腫瘤為各種惡性實體瘤，包括肝癌、胃癌、食道癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌等。

本發明具有的積極效果是：本發明采用β-葡聚糖誘導腫瘤抗原負載到未成熟的人樹突狀細胞內，從而得到人樹突狀細胞腫瘤疫苗，該疫苗能夠提高人樹突狀細胞的免疫效能，促進T細胞的增殖能力，特別能夠體外刺激T細胞具有特異性腫瘤殺傷能力，從而用于治療各種惡性實體瘤。

附圖說明

圖1為β-葡聚糖的結構式。

圖2為未成熟人樹突狀細胞吞噬β-葡聚糖的示意圖。

圖3為β-葡聚糖影響共刺激分子表達的示意圖。

圖4為β-葡聚糖影響細胞因子濃度的示意圖。

圖5為T細胞的特異性腫瘤殺傷能力的檢測示意圖。