[發(fā)明專利]一種含有鯉IGF2b基因的慢病毒在提高鯉魚產(chǎn)肉量上的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210087621.9
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102604897A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 袁新華;張寧;蘇勝彥;董在杰;徐跑
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A01K61/00
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀(jì)昌

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)魚類育種技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種含有鯉IGF2b基因的慢病毒在提高鯉魚產(chǎn)肉量上的應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前，獲得較快生長速度的鯉魚依然是產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求，因此，選育出生長速度快，品質(zhì)優(yōu)良的鯉魚品種，尤其是選擇優(yōu)良的候選基因及適當(dāng)?shù)奶幚矸椒ㄔ谔岣啧庺~生長速度的同時不影響其他性狀的表達，具有重要的意義。

傳統(tǒng)的原核內(nèi)顯微注射法、精子載體法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、反轉(zhuǎn)錄病毒載體法、細胞核移植方法等改善動物品種性能的方法皆因成本高、效率低或者插入片段小等缺點而無法廣泛應(yīng)用。

含有鯉IGF2b基因的慢病毒是一種用人工分離和修飾的方法獲得的病毒液，即根據(jù)鯉魚RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再設(shè)計相應(yīng)引物進行PCR擴增，用相應(yīng)內(nèi)切酶切割獲得含有IGF2b的基因片段，最終用此基因片段與載體pLenti6.3-IRES-EGFP相連接從而獲得含有鯉IGF2b基因的慢病毒；其具體制備方式見專利申請?zhí)枮?01110356210.0的專利申請文件中所述。

用此含有鯉IGF2b基因的慢病毒處理鯉魚來感染鯉特定組織中非分裂期和分裂期細胞，從而影響特定組織靶基因的表達以致其生長狀況發(fā)生變化。此種育種方法應(yīng)用于魚類可在短期內(nèi)確定具有目的基因的品系，提高鯉魚產(chǎn)肉量，從而縮短魚類育種時間，并且能使整合于靶細胞基因組的目的基因長期、穩(wěn)定的表達，此類研究至今未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

解決的技術(shù)問題：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種含有鯉IGF2b基因的慢病毒在提高鯉魚產(chǎn)肉量上的應(yīng)用。

技術(shù)方案：

具體處理步驟如下：

(1)用人工分離和修飾的方法獲得含有鯉IGF2b基因的慢病毒；

(2)讓鯉魚感染所述慢病毒，即在鯉魚體內(nèi)注射所述慢病毒；

(3)用綠色熒光來確定感染是否成功：感染48h后，通過熒光顯微鏡觀測法觀察綠色熒光蛋白的表達狀況，如有綠色熒光蛋白的表達，則表明所述鯉魚已感染上所述慢病毒；

作為本發(fā)明的進一步改進，步驟(2)中所述慢病毒的感染在幼魚階段完成。

作為本發(fā)明的更進一步改進，步驟(2)中，在所述鯉魚體重為5g時注射所述慢病毒。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，步驟(2)中鯉魚注射部位為背部肌肉。

作為本發(fā)明的更進一步優(yōu)選方案，步驟(2)中鯉魚注射部位為背鰭最前端定點到側(cè)線垂直距離的中間點。

本發(fā)明還包括觀測由于感染而引起鯉魚性狀的變化的步驟(4)：3個月后，驗證鯉魚生長狀況和血液指標(biāo)狀況。

有益效果

3個月后，驗證被感染鯉魚的生長狀況和血液指標(biāo)狀況，其驗證方法為根據(jù)陰性對照、陽性對照，對比不同注射劑量的鯉魚的體重變化狀況及血液指標(biāo)的變化狀況。結(jié)果顯示，用已檢測的含有鯉IGF2b基因的慢病毒感染鯉魚幼體，感染組相比對照組，鯉魚體重獲得了顯著增加的效果，且劑量較大時效果更好，同時對鯉魚血液指標(biāo)沒有影響，安全性好。

此種育種方法應(yīng)用于魚類可在短期內(nèi)確定具有目的基因的品系，縮短魚類育種時間，并且能使整合于靶細胞基因組的目的基因長期、穩(wěn)定的表達，由于未對血液指標(biāo)造成影響，所以安全性好。

附圖說明

圖1為熒光顯微鏡檢測到慢病毒注射48h后魚體綠色熒光蛋白的表達，通過此表達可以顯示被慢病毒感染的鯉魚背部肌肉的生長效果，有綠色熒光顯示說明已被感染

圖2養(yǎng)殖3個月后不同實驗組魚的體重性狀的差異

具體實施方式

實施例1

為了控制試驗誤差，所有注射工作由一個人完成，所有實驗組都在同一塘中養(yǎng)殖，所有的養(yǎng)殖管理均由一個人進行。

(1)含有鯉IGF2b基因的慢病毒來自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心鯉復(fù)合育種課題組，其制備方法參看專利申請?zhí)枮?01110356210.0的專利申請文件，250尾鯉取自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院無錫淡水漁業(yè)研究中心南泉養(yǎng)殖基地，共設(shè)立5個實驗組：

一個是不做任何處理的陰性對照組；

一個是注射不含鯉IGF2b基因的慢病毒稀釋液的陽性對照組，注射量為20μL，總計約含1.1×10⁵個病毒；