[發(fā)明專利]基于氣孔感應(yīng)小球藻閉合的免疫蒸騰抑制劑的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210085665.8
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102626111A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王根軒;李巖;高靜;徐珊珊
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P21/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.基于氣孔感應(yīng)小球藻閉合的免疫蒸騰抑制劑的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟是：

步驟(1).制備小球藻劑A，方法是：

首先將淡水小球藻接種到滅菌后的BG11固體培養(yǎng)基中，置于25℃恒溫光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，得到活化后的小球藻；所述的淡水小球藻來自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會淡水藻種庫，保藏編號為FACHB-7；

然后將活化后的小球藻接種到滅菌后的BG11液體培養(yǎng)基中，置于轉(zhuǎn)速150～180ｒ/min的搖床上振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20～25℃，培養(yǎng)時間為7～10個光照周期；一個光照周期為24小時，首先采用光強為2000～3000Lx的白色熒光燈光照14h，再置于黑暗中10h；

將培養(yǎng)后的小球藻置于離心機中離心，取沉淀物干燥稱重，用蒸餾水進行稀釋，得到純小球藻液，純小球藻液中純小球藻含量為10～20g/L；將純小球藻液置于121℃、0.12～0.15Mpa壓強下滅活60～80min，制成小球藻劑A；小球藻劑A于-20℃下凍存；

所述的BG11液體培養(yǎng)基配方及含量為：硝酸鈉1.5?g/L、磷酸氫二鉀0.04g/L、硫酸鎂0.075g/L、氯化鈣0.036?g/L、檸檬酸0.006?g/L、檸檬酸鐵銨0.006?g/L、乙二胺四乙酸二鈉0.001g/L、碳酸鈉0.02?g/L、硼酸0.00286?g/L、氯化錳0.00186g/L、硫酸鋅0.00022g/L、鉬酸鈉0.00039g/L、硫酸銅0.00008g/L、硝酸鈷0.00005g/L，用蒸餾水配制，然后用1mol/L的NaOH或HCl調(diào)pH至7.1；

所述的BG11固體培養(yǎng)基是在上述BG11液體培養(yǎng)基中按照每升15?g添加瓊脂得到；

步驟(2).制備輔劑B，方法是：

將CaCl₂·2H₂O和羧化殼聚糖溶解于蒸餾水中，攪拌均勻，得到輔劑B；輔劑B中CaCl₂·2H₂O的濃度為3g/L，羧化殼聚糖的濃度為0.01?g/L；

步驟(3).制備蒸騰抑制劑，方法是：

將小球藻劑A加入輔劑B中，攪拌均勻，得到免疫蒸騰抑制劑；小球藻劑A與輔劑B的體積比為0.01～0.05：1。