[發明專利]土壤溶磷真菌接種劑谷粒孢子粉及其制備方法

無效

• 申請號: 201210085415.4
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102618481A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 崔振
• 申請（專利權）人: 宋丹丹;崔振
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C05F11/08;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種土壤溶磷真菌接種劑谷粒孢子粉的制備方法，包括以下步驟：

a.以平陽正青霉Eupenicillium?euglaucum為母本，從其子囊孢子中篩選出一株利于作物根際分泌物生長和產酸能力強的無性系菌株Eupenicillium?euglaucum?anamorph?JB201015；

b.選出的菌株在22-27℃條件下培養活化1-2天后，用15mL無菌水洗脫孢子，制備孢子懸濁液；

c.吸取所述10mL孢子懸濁液，接種到100mL?PD培養液的三角瓶中，在22-27℃條件下，震蕩培養3-5天以獲得液體菌種；

d.將所述液體菌種/熟化谷粒比按5％(m/m：體積)接種到熟化谷粒中，然后將谷粒在25-27℃條件下，培養3-5天后，每隔2天翻動一次，共培養10-15天；

e.當每個谷粒分生孢子量不少于300萬個時，將谷粒直接粉碎得到孢子粉；當每個谷粒分生孢子不足300萬時，需適當延長培養時間，直至每個谷粒分生孢子量不少于300萬個，將谷粒直接粉碎得到孢子粉，最長培養時間為15天。

2.根據權利要求1中的土壤溶磷真菌接種劑谷粒孢子粉的制備方法，其特征在于還可以進一步包括以下步驟：

f.將獲得的孢子量不少于300萬個的谷粒菌種與熟化谷粒1∶1混合培養5-7天，當所有谷粒分生孢子量不少于300萬個時，將谷粒直接粉碎得到孢子粉。

3.根據權利要求2中的土壤溶磷真菌接種劑谷粒孢子粉的制備方法，其特征在于：

在步驟d中，所述熟化谷粒為秈米、粳米在2450MHZ微波中熟化2分鐘制成；或所述熟化谷粒為粒徑4-5mm的玉米碴在2450MHZ微波熟化3分鐘制成，其中所述熟化谷粒的含水量要控制在18-20％。

4.根據權利要求3中的土壤溶磷真菌接種劑谷粒孢子粉的制備方法，其特征在于：在步驟c中，所述震蕩為120轉/分鐘的方式。

5.根據權利要求3中的土壤溶磷真菌接種劑谷粒孢子粉的制備方法，其特征在于：將谷粒秈米、粳米和/或玉米碴在60℃的水中浸30-45分鐘后，在放入2450MHZ的微波中熟化2-3分鐘，從而制成熟化谷粒。

6.根據權利要求3中的土壤溶磷真菌接種劑谷粒孢子粉的制備方法，其特征在于：在所述步驟c中，所獲得的液體菌種為3×10⁷cfu/ml的菌絲體。

7.一種根據上述權利要求中的制備方法所制成的孢子粉，所述孢子粉采用以下步驟制備：

a.以平陽正青霉(Eupenicillium?euglaucum)為母本，從其子囊孢子中篩選出一株利于作物根際分泌物生長和產酸能力強的無性系菌株(Eupenicillium?euglaucum?anamorph?JB201015)；

b.選出的菌株在25℃條件下培養活化1-2天后，用15mL無菌水洗脫孢子，制備孢子懸濁液；

c.吸取所述10mL孢子懸濁液，接種到100mL?PD培養液的三角瓶中，在26℃條件下，震蕩培養3-5天以獲得液體菌種；

d.將秈米、粳米在2450MHZ微波中熟化2分鐘制成熟化谷粒；或將粒徑4-5mm的玉米碴在2450MHZ微波熟化3分鐘制成熟化谷粒；其中所述熟化谷粒的含水量要控制在18-20％；再將所述液體菌種/熟化谷粒比按5％(m/m：體積)接種到熟化谷粒中，然后將谷粒在25-27℃條件下，培養3-5天后，每隔2天翻動一次，共培養10-15天；

e.當每個谷粒分生孢子量不少于300萬個時，將谷粒直接粉碎得到孢子粉；當每個谷粒分生孢子不足300萬時，需適當延長培養時間，直至每個谷粒分生孢子量不少于300萬個，將谷粒直接粉碎得到孢子粉，最長培養時間為15天；

f.將獲得的孢子量不少于300萬個的谷粒菌種與熟化谷粒1∶1混合培養5-7天，當所有谷粒分生孢子量不少于300萬個時，將谷粒直接粉碎得到孢子粉。

8.根據權利要求7中的孢子粉，其特征在于：在制備步驟c中，所述震蕩為120轉/分鐘的方式。

9.根據權利要求8中的孢子粉，其特征在于：在制備步驟d中，是將谷粒秈米、粳米和/或玉米碴在60℃的水中浸30-45分鐘后，在放入2450MHZ的微波中熟化2-3分鐘，從而制成熟化谷粒。

10.根據權利要求9中的孢子粉，其特征在于：在所述步驟c中，所獲得的液體菌種為3×10⁷cfu/ml的菌絲體。