[發(fā)明專利]柔嫩艾美耳球蟲eIF3d基因及其應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210085264.2
• 申請日: 2012-03-27
• 公開（公告）號: CN103361364A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發(fā)明（設計）人: 韓紅玉;黃兵;孔春林;姜連連;董輝;朱順海;趙其平;李婷;王曄;薛璞;舒凡帆
• 申請（專利權）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/30
• 分類號: C12N15/30;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C07K14/455;C07K16/20;C07K16/06;A61K48/00;A61K39/012;A61P33/02
• 代理公司: 上海序倫律師事務所 31276
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發(fā)明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種柔嫩艾美耳球蟲真核翻譯起始因子3d基因(eukaryotic?translation?initiation?factor3d，eIF3d)及其應用。

背景技術

雞球蟲病是規(guī)模化養(yǎng)雞場最容易發(fā)生的寄生蟲病，它的病原體為艾美耳屬雞球蟲。雞球蟲病能夠導致禽類的生長緩慢和飼料轉化率降低，間接地引起養(yǎng)殖經(jīng)濟損失，如果嚴重時，則直接導致雞只大量死亡，從而造成養(yǎng)殖戶的重大經(jīng)濟損失。目前，有報道表明，每年因雞球蟲病，就給全世界的養(yǎng)殖業(yè)造成了約5億英鎊的巨大損失。當前在禽類的養(yǎng)殖業(yè)中主要還是依靠藥物來預防控制雞球蟲病，但是球蟲抗藥性的問題日益突出。同時雞體藥物殘留和藥物價格過高等問題也促使人們去尋找新的方法來防治雞球蟲病。現(xiàn)階段，一些研究工作者通過尋找與雞球蟲發(fā)育、入侵相關的基因，研制基因工程疫苗成為防治雞球蟲病的新思路，也成為現(xiàn)階段雞球蟲研究的熱點。而尋找到合適的理想球蟲抗原，就成為了研制基因工程疫苗的突破點和難點。

柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria?tenella)是一種致病性和危害性最大的雞球蟲，它主要寄生于盲腸及其附近區(qū)域，能夠引起出血性腸炎，對雛雞危害最大，嚴重時能引起較高的死亡率。

真核翻譯起始因子又稱為真核起始因子，是指和真核翻譯起始相關的一些蛋白質。目前已被鑒定的真核翻譯起始因子共有12種。真核生物的翻譯起始就是通過這些真核翻譯起始因子之間或者不同的真核翻譯起始因子與核糖體、mRNA以及起始tRNA之間的相互作用來完成。真核翻譯起始因子中最大的起始因子是真核翻譯起始因子3(eIF3)復合物，eIF3在真核翻譯起始進程中起著核心作用。

不過，到目前為止還沒有柔嫩艾美耳球蟲eIF3d基因的研究報道。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種柔嫩艾美耳球蟲eIF3d基因，該EteIF3d基因編碼的重組蛋白對雞球蟲具有良好的免疫保護效果，適于開發(fā)成防治雞球蟲病的新疫苗。

此外，還需要提供一種柔嫩艾美耳球蟲eIF3d基因的應用。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明通過如下技術方案實現(xiàn)：

在本發(fā)明的一個方面，提供了一種柔嫩艾美耳球蟲基因，所述基因為編碼SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列的柔嫩艾美耳球蟲eIF3d基因。

優(yōu)選的，所述基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2所示的DNA序列。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種柔嫩艾美耳球蟲蛋白質，所述蛋白質為柔嫩艾美耳球蟲eIF3d蛋白質，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種包含上述柔嫩艾美耳球蟲基因的重組載體。

所述重組載體包括重組克隆載體或重組表達載體，重組表達載體包括重組原核表達載體、重組真核表達載體。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種宿主細胞，包含上述重組載體，或已用上述基因轉化或轉染。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種抗血清，該抗血清是用上述重組載體表達的重組蛋白免疫動物而制得。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種抗體IgG，該抗體IgG是由上述抗血清經(jīng)純化而制得。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述柔嫩艾美耳球蟲基因在制備預防或治療雞球蟲病的疫苗或藥物中的應用。

所述疫苗或藥物通過抑制柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵宿主細胞而阻斷球蟲生活史來發(fā)揮作用。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述柔嫩艾美耳球蟲蛋白質在制備預防或治療雞球蟲病的疫苗或藥物中的應用。

所述疫苗或藥物通過抑制柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵宿主細胞而阻斷球蟲生活史來發(fā)揮作用。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述柔嫩艾美耳球蟲基因在篩選預防或治療雞球蟲病的藥物中的應用。

本發(fā)明柔嫩艾美耳球蟲eIF3d基因，與子孢子入侵宿主細胞相關，Western-blot分析表明本發(fā)明EteIF3d的重組表達蛋白具有良好的抗原性；免疫保護性試驗結果顯示EteIF3d重組蛋白免疫組在增重、卵囊減少率、病變記分等方面都強于感染對照組，對雞體內抗體水平進行檢測，結果EteIF3d重組蛋白免疫后的雞，在整個免疫期及感染期均有較高抗體存在于雞體內。因此，本發(fā)明的EteIF3d基因，為開發(fā)防治雞球蟲病的新疫苗提供了新的候選抗原，適于開發(fā)成防治雞球蟲病的新基因工程疫苗。

附圖說明

下面結合附圖和具體實施方式對本發(fā)明作進一步詳細的說明。