[發明專利]一種轉基因水稻外源插入載體旁側序列及其應用

無效

• 申請號: 201210084127.7
• 申請日: 2012-03-27
• 公開（公告）號: CN102628040A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 楊正友;李文華;趙鳳春;田園
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

????本發明涉及的是一種生物技術領域的基因序列。具體的說，涉及一種轉基因水稻品系SK-2的外源插入載體的旁側序列。?

背景技術

自1983年首例轉基因煙草作物問世以來,?基因工程技術發展日新月異,?轉基因作物新品種不斷涌現，近年來，玉米、大豆、油菜、棉花、番茄等轉基因作物已在許多國家允許種植和生產，并被廣泛用作食品或飼料的加工原料。由于轉基因產品存在著生態風險和食品安全等一系列的問題，因此，世界各國政府和相關國際組織紛紛制定相應的安全管理法規，加強遺傳改良作物的規范管理，并對遺傳改良作物及其產品實施標識制度。?

為了應對遺傳改良作物管理相關的法律法規和制度，建立高效、快速、特異的檢測技術十分必要，它是各國際組織和國家管理遺傳改良作物的有力技術支撐。基于核酸的聚合酶鏈反應（PCR）檢測技術因具有高靈敏度和特異性強的優點，已成為目前最重要、應用最廣泛的遺傳改良作物及其產品檢測技術。PCR檢測方法建立的主要依據是特異性的擴增遺傳改良植物的外源基因片段。在轉基因植物中，穩定表達的外源DNA插入片段一般包括啟動子、目的基因和終止子三類元件。針對擴增的外源DNA片段差異，PCR檢測策略可以分為四種，即通用元件篩選PCR檢測、基因特異性PCR檢測、構建特異性PCR檢測和品系特異性PCR檢測。品系特異性PCR檢測是通過檢測外源插入載體與植物基因組的連接區序列實現的。由于每個遺傳改良作物品系，都具有特異性的外源插入載體與植物基因組的連接區序列，并且連接區序列是單拷貝的，因此品系特異性檢測方法具有較篩選、基因特異性和構建特異性PCR檢測方法更高的特異性和準確性，能夠特異性的檢測專一的遺傳改良作物品系。因此，外源插入片段的旁側序列是建立轉基因植物品系特異性檢測方法的重要技術資料。?

水稻是我國最重要的糧食作物之一，隨著轉基因技術在水稻中的廣泛研究和應用，已經有多個轉基因水稻品系進行了環境釋放，申請商業化種植。為了對轉基因水稻進行監督管理，保障其健康發展，對轉基因水稻的外源插入片段的旁側序列進行分離非常關鍵。?

目前已經有部分專利和文獻報道了轉基因植物外源插入片段的旁側序列，例如：張大兵等人于2006年利用TAIL-PCR方法分析了玉米品系MON863的外源插入片段的旁側序列，建立了轉基因MON863玉米的品系特異性檢測方法，謝家建等人于2007年利用TAIL-PCR、genome?walking和D-PCR等方法獲得了轉基因水稻克螟稻、Bt汕優63、科豐6號、科豐8號的外源插入片段的旁側序列，并建立了品系特異性的檢測方法。然而，在對現有的專利和文獻的分析中發現，還沒有任何關于轉基因水稻品系SK-2的外源插入片段的旁側序列的文章和專利報道。?

發明內容

????針對上述領域中的空白，提供了一種轉基因水稻品系SK-2的外源插入片段的旁側序列。?

????進一步，本發明還提供該轉基因品系特異性的PCR檢測方法。?

????一種轉基因水稻品系SK-2的外源插入片段的旁側序列，所述旁側序列為3'端旁側序列，其特征在于：3'端旁側序列如SEQ?ID?NO:1所示。?

????一種轉基因水稻品系SK-2的外源插入片段的旁側序列，所述旁側序列為5'端旁側序列，其特征在于：5'端旁側序列如SEQ?ID?NO:2所示。?

????3'端旁側序列的制備方法，其特征在于提取轉基因水稻品系SK-2植物基因組DNA，通過TAIL-PCR擴增得到。?

????5’端旁側序列的制備方法，其特征在于提取轉基因水稻品系SK-2植物基因組DNA，通過PCR擴增得到。?

轉基因水稻品系SK-2的外源插入片段的旁側序列的定性PCR檢測方法，其特征在于：所述PCR反應中的兩條引物組合為3’端旁側序列的特異性引物：一條引物為依據SEQ?ID?NO:1中1-2262位序列設計的正向引物，另一條引物為依據SEQ?ID?NO:1的2263-3221位序列設計的反向引物。合成引物如下：Sk2-F1：5'-CCACCACTTCAAGAACTCTGTAGC-3'和Sk2-R2:?5'-GTAGGGGTAGGTA?ATTGGGAAGG-3'。?