[發明專利]家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4及其基因

有效

• 申請號: 201210083851.8
• 申請日: 2012-03-27
• 公開（公告）號: CN102604906A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 趙萍;譚祥;夏慶友;胡曉明;陳全梅
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/63;C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，涉及一種谷胱甘肽-S-轉移酶及其基因。

背景技術

由于有機合成殺蟲劑具有廣譜、高效、快速、使用方便及經濟效益顯著等特點，在農業生產和衛生防治等領域廣泛應用。但隨著殺蟲劑大量、長期及頻繁的使用，昆蟲抗藥性發展迅速，具有抗藥性的害蟲種類成倍增長，其中以雙翅目和鱗翅目昆蟲居多。

谷胱甘肽-S-轉移酶（glutathione?S-transferases,?GSTs）是生物體內廣泛存在的一類重要解毒酶。昆蟲體內的GSTs對殺蟲劑有代謝解毒的作用，在昆蟲的殺蟲劑抗藥形成中發揮重要作用。研究發現，與昆蟲抗藥性相關的GSTs主要是昆蟲特異的delta及epsilon類。家蠶作為鱗翅目昆蟲模式生物，對家蠶GSTs進行克隆及功能研究，闡明GSTs與殺蟲劑抗藥性之間的關系，有助于對農業生產中害蟲的生物防治提供理論和實踐指導。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶，目的之二在于提供所述谷胱甘肽-S-轉移酶的基因，目的之三在于提供含有所述谷胱甘肽-S-轉移酶基因的重組表達載體，目的之四在于提供含有所述重組表達載體的工程菌，目的之五在于提供所述谷胱甘肽-S-轉移酶的制備方法。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、如下（a）或（b）的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4：

（a）由SEQ?ID?No.2中第23位至第245位氨基酸組成的蛋白質；

（b）在（a）限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或多個氨基酸且與（a）限定的蛋白質具有相同或相似活性的由（a）衍生的蛋白質。

進一步，（a）限定的蛋白質的N末端還有信號肽序列，所述信號肽序列由SEQ?ID?No.2中第1位至第22位氨基酸組成。

進一步，（b）限定的蛋白質由SEQ?ID?No.2中第25位至第245位氨基酸組成。

2、編碼（a）或（b）的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4的基因。

進一步，編碼（a）限定的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4的基因由SEQ?ID?No.1中第157位至第828位核苷酸組成。

更進一步，編碼（a）限定的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4的基因的5’末端還有信號肽編碼序列，由SEQ?ID?No.1中第91位至第156位核苷酸組成。

更進一步，編碼（a）限定的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4的基因mRNA全長序列由SEQ?ID?No.1中第1位至第1049位核苷酸組成。

進一步，編碼（b）限定的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4的基因由SEQ?ID?No.1中第163位至第828位核苷酸組成。

3、含有上述任一基因的重組表達載體。

進一步，所述重組表達載體以原核表達載體p28為基礎載體，所述原核表達載體p28是將pET28a質粒的多克隆位點改造而得，改造后的多克隆位點序列如SEQ?ID?No.11所示。

4、含有上述重組表達載體的工程菌。

進一步，所述工程菌以大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株為宿主菌。

5、（b）限定的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4的制備方法，包括以下步驟：將由SEQ?ID?No.1中第163位至第828位核苷酸組成的基因克隆入原核表達載體p28的多克隆位點，獲得重組表達載體BmGSTd4-p28，再將其轉入大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株，獲得工程菌BmGSTd4-p28-Rosetta(DE3)，用終濃度為0.2mM的異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷于16℃誘導表達20小時，收集誘導表達后的菌體，超聲破碎，離心，收集上清，用Ni²⁺-NTA?親和層析純化，脫鹽，超濾濃縮，即制得由SEQ?ID?No.2中第25位至第245位氨基酸組成的家蠶谷胱甘肽-S-轉移酶BmGSTD4；所述原核表達載體p28是將pET28a質粒的多克隆位點改造而得，改造后的多克隆位點序列如SEQ?ID?No.11所示。