[發明專利]玫瑰黃鏈霉菌的一個負調控基因及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210083746.4
• 申請日: 2012-03-27
• 公開（公告）號: CN102634523A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 李亞寧;劉大群;孟慶芳;張立榮;李星;張娜;冀紅柳;張汀
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C07K14/36;C12N15/63;C12N1/21;C12N15/76;A01N47/44;A01P3/00;C12N15/10;C12R1/465
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 米文智

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體的說，涉及玫瑰黃鏈霉菌（Streptomyces?roseoflavus）Men-myco-93-63的?nsdB_mgh?基因、制備方法及其應用。

背景技術

棉花黃萎病、棉花枯萎病和棉鈴蟲是棉花生產上的重大病蟲害，隨著抗蟲棉和抗枯萎病品種的利用，棉鈴蟲和棉花枯萎病均得到了有效的控制。但棉花黃萎病作為一種世界性的、典型的土傳病害，其防治始終是世界性難題，至今尚無抗病品種或效果明顯的防治藥劑和方法。該病害遍及幾十個植棉國，已成為世界棉花生產上的最主要威脅。九十年代后該病害在我國各產棉區不斷爆發和流行。目前我國每年棉花種植面積約8000萬畝，黃萎病發病面積達3000多萬畝，重病田2000萬畝，每年損失皮棉約10萬噸，折合人民幣14億元。河北省每年植棉面積約1000萬畝，發病面積300多萬畝，損失約1.4億元。隨著人們環保意識的增強，生物防治因其對環境、生態和人類健康安全的優點，在世界各國得到了廣泛的重視并發揮著越來越重要的作用。利用生物防治方法控制棉花黃萎病也越來越受到人們的重視。國內外雖均有利用活菌進行防治棉花黃萎病研究的報道，但因為活菌易受環境條件、土壤因素等影響，防效不穩定，在生產上很少應用。利用生防菌產生的抗生素或其它代謝產物防治該病害可以減輕或避免上述不利因素的影響?？股卦谵r業上的應用開始于本世紀50年代，美國的科學家利用鏈霉素、土霉素及二者的混合物“農霉素”防治果樹和蔬菜病害，取得了很好的防治效果。我國在利用抗生素防治植物病害方面也取得了很大進展。井崗霉素在防治水稻紋枯病上的大規模應用已取代了化學農藥的防治，且連續使用多年尚未發現病原菌產生抗藥性。但當前的生產中未發現利用抗生素防治棉花黃萎病的報道。

本研究小組已經獨立發現并從土壤中分離得到生防鏈霉菌菌株Men-myco-93-63，在室內及大田實驗中，已經證實該菌株及其發酵液對棉花黃萎病菌、番茄灰霉病菌、瓜類白粉病菌等十幾種重要植物病原菌的生長均表現很強的抑制作用（?Liu?D?Q,?Anderson?N?A,?Kinkel?L?L.?Selection?and?characterization?of?Streptomyces?suppressive?to?the?potato?scab?pathogens.?Canadian?Journal?of?Microbiology,?1996,?42(5):?487-502；?劉大群,?楊文香,?祁碧菽,?等.?拮抗鏈霉菌?Men-myco-93-63?及其發酵液對棉花黃萎病菌生長的影響.?河北農業大學學報,?1999,?22(4):?79-82；郭敬華,孟慶芳,李亞寧,等.玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63發酵液對黃瓜白粉病抗性的影響.華北農學報,2007,22(s),?1~4.；?孟慶芳,張汀,劉大群.番茄灰霉病生防菌的篩選與研究.中國生物防治,2005,21:139~144.）。經16S?r?RNA序列分析及120bp的γ可變區BLAST比較，結合形態學及生理生化特征分析，將該菌株鑒定玫瑰黃鏈霉菌（Streptomyces?roseoflavus）（微檢2005年A001號）。

另外，本研究小組已在Men-myco-93-63菌株中克隆得到了nsdA_mgh基因（沈鳳英,?劉力強,?吳偉剛,?等.?玫瑰黃鏈霉菌?Men-myco-93-63?負調控基因?nsdA_mgh的克隆及序列分析.?華北農學報,?2009,?24(5):?77-80），試驗表明，阻斷該負調控基因后，突變株在搖瓶水平上對棉花黃萎病菌的抑制能力提高了一倍（沈鳳英.?玫瑰黃鏈霉菌?Men-myco-93-63?接合轉移體系及?nsdA?基因的研究.?河北農業大學,?碩士學位論文,?2009）。

基于上述研究成果，本發明人進一步深入研究Men-myco-93-63菌株，得到另一種負調控基因nsdB_mgh基因。

發明內容

本發明的目的在于提供一種玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63?nsdB_mgh基因。

本發明的第二個目的在于提供上述玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63?nsdB_mgh基因的制備。