[發明專利]一種化學-生物酶法組合制備2′-脫氧尿苷的方法

有效

• 申請號: 201210083493.0
• 申請日: 2012-03-27
• 公開（公告）號: CN102827902A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 應國清;錢捷;彭美紅;王鴻;蒲通;易喻;梅建鳳;陳建澍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P19/38
• 分類號: C12P19/38
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種化學-生物酶法組合制備2′-脫氧尿苷的方法，所述方法包括：

(1)以α/β混合構型的3′5′-O-二對氯苯甲酰基-2-脫氧-D-核糖-1-氯化物為原料，加入磷酸和4A分子篩，以三丁基胺為催化劑，-10～0℃于氮氣保護下反應16～24小時；

(2)步驟(1)反應結束后，過濾除去分子篩，濾液蒸干得到糖漿狀物質用四甲基二戊酮溶解后，水洗，取有機相在-15℃～10℃下加入環己胺攪拌反應至析出白色沉淀，過濾，濾餅依次用四甲基二戊酮和丙酮洗滌，真空干燥得到3，5-O-二(4-苯甲酰氯)-2-脫氧-α-D-核糖-1-磷酸二環己基胺鹽；

(3)3，5-O-二(4-苯甲酰氯)-2-脫氧-α-D-核糖-1-磷酸二環己基胺鹽在弱堿溶液中于25℃～100℃下攪拌反應12h～72h脫除保護基，反應液濃縮、乙醇洗滌，真空干燥得到2-脫氧-α-D-核糖-1-磷酸鹽；所述弱堿溶液為下列之一：環己胺甲醇溶液，氫氧化鈉甲醇溶液，氫氧化鉀水溶液或氫氧化鈉水溶液；

(4)2-脫氧-α-D-核糖-1-磷酸鹽與尿嘧啶在尿苷磷酸化酶催化下，在pH值為6～8的磷酸鹽緩沖液中、45～65℃下反應3～24小時，制得所述2′-脫氧尿苷。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)反應溶劑為乙腈，四甲基二戊酮或丙酮。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中三丁基胺為正三丁基胺，3′5′-O-二對氯苯甲酰基-2-脫氧-D-核糖-1-氯化物與正三丁基胺的摩爾用量之比為1∶2～6。