[發明專利]一種基于拉曼光譜檢測人乳腺癌細胞MCF-7的細胞探針復合物及其制備方法

有效

• 申請號: 201210080376.9
• 申請日: 2012-03-24
• 公開（公告）號: CN102621125A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 吳萍;蔡稱心;張卉
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;C12N15/115
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 韓朝暉

1.一種基于拉曼光譜檢測人乳腺癌細胞MCF-7的細胞探針復合物，其特征在于，所述的探針復合物以序列為?5’–GCA?GTT?GAT?CCT?TTG?GAT?ACC?CTG?G–3’的核酸適體S2.2為模板，其堿基上沉積金/銀雙金屬合金納米粒子，納米粒子表面固載拉曼信號分子Rh?6G。

2.根據權利要求1所述的細胞探針復合物，其特征在于，所述的細胞探針復合物其粒徑為20～120nm。

3.根據權利要求1所述的細胞探針復合物，其特征在于，所述的細胞探針復合物按以下方法合成：將核酸適體S2.2溶解在pH?7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，加入體積比1~5：1的NaAuCl₄和AgNO₃溶液，混合并攪拌均勻，在暗處放置12小時以上，置于紫外燈下光照5?min至60?min，形成Au-Ag-aptamer納米復合物；將Rh?6G溶液加入到Au-Ag-aptamer納米復合物分散液中，避光攪拌后離心處理，用PBS洗滌除去未吸附的Rh?6G分子，得到所述的探針復合物。

4.一種權利要求1所述的人乳腺癌細胞MCF-7的細胞探針復合物的制備方法，其特征在于，將序列為?5’–GCA?GTT?GAT?CCT?TTG?GAT?ACC?CTG?G–3’?的核酸適體S2.2溶解在pH?7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，加入體積比1~5：1的NaAuCl₄和AgNO₃溶液，混合并攪拌均勻，在暗處放置12小時以上，置于紫外燈下光照5?min至60?min，形成Au-Ag-aptamer納米復合物；將Rh?6G溶液加入到Au-Ag-aptamer納米復合物分散液中，避光攪拌后離心處理，用PBS洗滌除去未吸附的Rh?6G分子，得到所述的探針復合物。

5.根據權利要求4所述的人乳腺癌細胞MCF-7的細胞探針復合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將序列為?5’–GCA?GTT?GAT?CCT?TTG?GAT?ACC?CTG?G–3’的核酸適體S2.2用0.1?mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH?7.4）溶解，濃度為300?ng/mL；

2）將1mol/L?NaAuCl₄和1mol/L?AgNO₃溶液按體積比1~5：1混合，并加入到步驟1）中的核酸適體溶液中，在4℃下連續攪拌0.5–2小時，并在暗處避光保存12h以上，使Au³⁺和Ag⁺吸附到核酸適體的堿基上，得到Au³⁺-Ag⁺-aptamer復合物；

3）將Au³⁺-Ag⁺-aptamer復合物在波數為254?nm的紫外燈下光照5min-60min，溶液顏色由無色逐漸變為藍色，得到Au-Ag-aptamer納米復合物；

4）將Rh?6G溶液加入到Au-Ag-aptamer納米復合物分散液中，控制Rh?6G的最終濃度為1μmol/L，在4℃下避光攪拌1h，離心處理后用0.1?mol/L?PBS溶液（pH?7.4）洗滌去除未吸附的Rh?6G分子，得到所述的探針復合物Rh?6G-Au-Ag-aptamer。

6.根據權利要求5所述的人乳腺癌細胞MCF-7的細胞探針復合物的制備方法，其特征在于，所述的步驟2）中，混合液中Ag⁺與適體DNA的堿基的物質量比為1:5。