[發(fā)明專(zhuān)利]水稻種胚特異表達(dá)的基因OsESG1、克隆方法及應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210078996.9
• 申請(qǐng)日: 2012-03-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102628050A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉煒;房孝良;王慶國(guó);李臻;侯蕾
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高新技術(shù)研究中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/29
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/29;C12N15/63;C12N15/84;A01H5/00;C12N15/10
• 代理公司: 濟(jì)南誠(chéng)智商標(biāo)專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

1.一種水稻種胚中特異表達(dá)的基因，它是具有SEQ?ID?NO.1中所示核苷酸序列的片段。

2.一種含有權(quán)利要求1的基因的表達(dá)載體。

3.一種含有權(quán)利要求1的基因的正義表達(dá)載體pCambia1301P::OsESG1，其特征是，它是將基因OsESG1以5’到3’方向構(gòu)建入表達(dá)載體pCambia1301P；所述pCambia1301P的獲取方法為：以載體pCambia1301為骨架，經(jīng)EcoR?I、KpnI雙酶切后，與經(jīng)EcoR?I、KpnI雙酶切的CaMV?35S啟動(dòng)子片段連接。

4.一種含有權(quán)利要求1的基因的反義表達(dá)載體pCambia1301P::AOsESG1，其特征是，它是將基因OsESG1以3’到5’方向構(gòu)建入表達(dá)載體pCambia1301P；所述pCambia1301P的獲取方法為：以載體pCambia1301為骨架，經(jīng)EcoR?I、KpnI雙酶切后，與經(jīng)EcoR?I、KpnI雙酶切的CaMV?35S啟動(dòng)子片段連接。

5.一種轉(zhuǎn)基因植株的獲取方法，其特征是，將權(quán)利要求4的反義表達(dá)載體pCambia1301P::AOsESG1農(nóng)桿菌介導(dǎo)水稻遺傳轉(zhuǎn)化，獲得轉(zhuǎn)基因植株。

6.權(quán)利要求1所述的基因的克隆方法，其特征是，以水稻基因組DNA為模板，以通過(guò)基因序列設(shè)計(jì)的帶有酶切位點(diǎn)KpnI、BamH?I的序列為引物，經(jīng)過(guò)PCR獲得。

7.如權(quán)利要求6所述的基因的克隆方法，其特征是，所述引物序列為：

OsESG1-F：5’-GGGGTACCGCAATGATACTCAACGTGATC-3’；

OsESG1-R：5’-CGGGATCCAACTTCCACGGAATATATATCAC-3’；

PCR反應(yīng)體系：含有Mg²⁺的Taq酶緩沖液5μl，2.5mM的dNTP3μl，10μM的OsESG1-F引物1μl、10μM的OsESG1-R引物1μl，水稻DNA?4μl，Taq酶0.5μl，加滅菌雙蒸水至50μl；

PCR反應(yīng)程序：98℃10min，94℃1min，56℃30s，72℃2.5min，35個(gè)循環(huán)，72℃10min。

8.權(quán)利要求1所述的基因在調(diào)控種子根部發(fā)育方面的應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征是，通過(guò)參與胚中細(xì)胞分裂過(guò)程，通過(guò)影響細(xì)胞的體積及大小調(diào)控種子根部發(fā)育。