[發明專利]一種用于培育轉基因植物的培養基

有效

• 申請號: 201210078381.6
• 申請日: 2012-03-22
• 公開（公告）號: CN103320377A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 漆小泉;趙素珍
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12N5/10;A01H4/00;C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種用于培育轉基因植物的培養基。

背景技術

短柄草學名二穗短柄草(Brachypodium?distachyon(L.)P.Beauv)，又名Purple?False?Brome，起源于地中海和中東地區，屬禾亞科(Pooideae)短柄草屬(Brachypodieae)，在系統進化中與溫帶和谷類糧食作物(Temperate?cereals)、禾草類植物(Meadow?and?Forage?grasses)處于同一進化分枝。由于短柄草植株矮小(15-20cm)，基因組只有272Mb，自花授粉、生育期短(8-12周)，易栽培，近年來已經迅速發展成為一種新的溫帶和谷類糧食、禾草類植物的模式植物。2010年2月份國際短柄草啟動委員會(The?International?Brachypodium?Initiative)已經完成了二穗短柄草Bd21的全基因組測序分析工作(http://www.brachypodium.org)。作為研究溫帶和谷類糧食、禾草類植物基因功能的模式植物，高效快速的農桿菌轉化系統至關重要。

國際上早在2001年就開始對短柄草的農桿菌轉化進行研究，但所用基因型不同，而且平均轉化效率很低(Draper，J等，2001)。2008年美國USDA?Western?Regional?Research?Center的John?Vogel，以短柄草株系Bd21-3作為受體，使平均轉化效率達到37％，所用誘導愈傷培養基是：LS鹽，3％蔗糖，2，4-D?11.25μM，0.2％植物凝膠，然而Bd21-3在遺傳背景上與Bd21有很大差異(Vogel，J等，2008)。英國John?Innes?Centre的Philippe?Vain以測序株系Bd21建立了高效的轉化體系，該體系以MS培養基為基本培養基，潮霉素為植物篩選標記，操作繁瑣，而且不適合國內應用。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種用于培育轉基因短柄草的培養基組。

本發明提供的培養基組，由愈傷誘導培養基、繼代培養基、共培養培養基、篩選培養基和再生培養基組成；

所述愈傷誘導培養基是在MS基本培養基中添加2，4-D、麥芽糖、L-天冬酰胺、肌醇、水解酪蛋白、脯氨酸和鹽酸硫胺素，得到愈傷誘導培養基；其中，所述2，4-D在所述愈傷誘導培養基中的終濃度為2.5mg/L，所述麥芽糖在所述愈傷誘導培養基中的終濃度為30mg/L，所述L-天冬酰胺在所述愈傷誘導培養基中的終濃度為150mg/L，所述肌醇在所述愈傷誘導培養基中的終濃度為0.2g/L，所述水解酪蛋白在所述愈傷誘導培養基中的終濃度為0.5g/L，所述脯氨酸在所述愈傷誘導培養基中的終濃度為700mg/L，所述鹽酸硫胺素在所述愈傷誘導培養基中的終濃度為1.5mg/L；

所述繼代培養基是在MS基本培養基中添加2，4-D和6-BA，得到繼代培養基；其中，所述2，4-D在所述繼代培養基中的終濃度為2.5mg/L，所述6-BA在所述繼代培養基中的終濃度為0.01mg/L，

所述共培養培養基是在MS基本培養基中添加葡萄糖和乙酰丁香酮，得到共培養培養基；其中，所述葡萄糖在所述共培養培養基中的終濃度為10g/L，所述乙酰丁香酮在所述共培養培養基中的終濃度為200μM，

所述篩選培養基是在MS基本培養基中添加巴龍霉素和特美汀，得到篩選培養基；其中，所述巴龍霉素在所述篩選培養基中的終濃度為25mg/L-50mg/L，所述特美汀在所述篩選培養基中的終濃度為125mg/L-225mg/L；

所述再生培養基是在MS基本培養基中添加細胞激動素，得到再生培養基；其中，所述細胞激動素在所述再生培養基中的終濃度為0.2mg/L。

上述培養基組中，所述篩選培養基為如下篩選培養基I或篩選培養基II：

所述篩選培養基I中，所述巴龍霉素在所述篩選培養基I中的終濃度為25mg/L，所述特美汀在所述篩選培養基I中的終濃度為225mg/L；

所述篩選培養基II中，所述巴龍霉素在所述篩選培養基II中的終濃度為50mg/L，所述特美汀在所述篩選培養基II中的終濃度為125mg/L。

上述培養基組中，各種所述培養基中均還包括凝固劑，所述凝固劑具體為瓊脂，所述瓊脂在所述各種培養基中的濃度均為7g/L。

本發明的另一個目的是提供一種制備上述培養基組的方法。

本發明提供的方法，包括如下步驟：