[發(fā)明專利]一種快速免標(biāo)記檢測硫離子的方法

無效

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• 申請日: 2012-03-22
• 公開（公告）號: CN102608091A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾令文;劉杰;陳俊華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強(qiáng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種硫離子的檢測方法，特別涉及一種快速免標(biāo)記檢測硫離子的方法。

背景技術(shù)

地下水（特別是溫泉水）及生活污水，通常含有硫化物，如硫磺泉等。當(dāng)大量生活污水排入水系或下水道，由于含硫有機(jī)物受微生物作用而分解出硫化物，所釋出的硫化氫是造成管道維修工人喪命的主要禍魁。某些工業(yè)廢水如石油煉制、人造纖維、印刷、制革、造氣、選礦和造紙等廢水中，亦可發(fā)現(xiàn)含硫化物。

水中的硫化物容易逸散于空氣中，產(chǎn)生臭味，且毒性很大。它可與人體細(xì)胞色素、氧化酶以及該類物質(zhì)中的二硫鍵作用，影響細(xì)胞氧化過程，造成細(xì)胞組織缺氧，危及人的生命。水中硫化氫可消耗水中的氧氣，并致水生生物死亡。硫化氫除自身能腐蝕金屬外，還可以被污水中的微生物氧化成硫酸，進(jìn)而腐蝕下水道等。因此，硫化物是水體污染的一項(xiàng)重要指標(biāo)。國標(biāo)規(guī)定硫化物濃度低于1?mg/L。

水中存在的硫化物，包括溶解性的H₂S、HS^-、S^2-，存在于懸浮物中的可溶性硫化物、酸可溶性金屬硫化物，以及未電離的有機(jī)，無機(jī)類硫化物。當(dāng)用絮凝和沉淀法把懸浮固體除去之后，剩余的為溶解的硫化物。通常所測定的水中硫化物系指溶解的H₂S和S^2-，以及酸溶性金屬硫化物。

對硫化物的檢測能加強(qiáng)環(huán)境污染防治工作，及時(shí)排查陰離子污染物及環(huán)境隱患，解決危害群眾健康和生態(tài)環(huán)境的突出問題，對環(huán)境和社會的可持續(xù)發(fā)展做出貢獻(xiàn)；有利于督促企業(yè)做好職業(yè)健康監(jiān)護(hù)工作、開展日常檢測評價(jià)工作、規(guī)范職業(yè)病危害告知制度等方面開展職業(yè)病防治的監(jiān)督管理工作，對勞動(dòng)者接觸危害因素造成的職業(yè)病損害做到早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)和早處理，切實(shí)防止群體性職業(yè)病危害事件的發(fā)生；將有利于國家對食品、化妝品及高危行業(yè)等企業(yè)實(shí)施更為科學(xué)和有效的監(jiān)管，對提高產(chǎn)品質(zhì)量和擴(kuò)大產(chǎn)品出口范圍、對企業(yè)和社會健康發(fā)展都具有重要的意義。

硫化物的檢測方法有較多報(bào)道，屬于儀器檢測方法的，有離子色譜法、間接原子吸收分光光度法、庫侖滴定法、離子選擇電極法、極譜法、電流滴定法、電位滴定法、冷原子熒光法、離子交換高壓液相色譜法、陽極溶出伏安法、流動(dòng)注射法等。近年來，原子光譜與ICP技術(shù)的聯(lián)用，提高了檢測的靈敏度，拓寬了檢測的線性范圍，而ICP-MS使檢測更加靈敏，數(shù)據(jù)分析更加方便。但是，此類儀器較為昂貴，在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室中的推廣應(yīng)用因此受到限制。除光譜法外，以亞甲藍(lán)小分子為代表的化學(xué)傳感方法也有一定的發(fā)展，但尚有靈敏度低的不足之處，檢測的可靠性和準(zhǔn)確性也不足。分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，為利用生物大分子(蛋白質(zhì)、DNA等)的特異性檢測各種靶物質(zhì)提供了有利條件。最近，四川大學(xué)的XiaoDan等利用S^2-與PbO/SiO₂納米顆粒的特異性作用，設(shè)計(jì)了一種新型生物傳感方法，通過檢測S^2-與PbO/SiO₂高親和性的相互作用后產(chǎn)生的熒光變化實(shí)現(xiàn)對S^2-的特異性檢測。該方法具有較高的特異性，可排除實(shí)際樣品體系中大多數(shù)離子的干擾，檢測限可以達(dá)到1.38×10^-7?mol/L。但PbO/SiO₂納米顆粒合成復(fù)雜耗時(shí)，檢測成本仍然較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種簡便可行的硫離子濃度檢測方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種快速免標(biāo)記檢測硫離子的方法，包括如下步驟：

1)??將隨機(jī)互補(bǔ)雙鏈DNA序列溶解，得到DNA溶液；

2)??在DNA溶液中加入還原劑，混合均勻，之后加入二價(jià)銅離子，混勻；

3)??避光還原反應(yīng)得到含有銅納米顆粒的隨機(jī)DNA雙鏈，該DNA雙鏈為檢測用DNA鏈；

4)??將標(biāo)準(zhǔn)濃度的硫離子溶液與檢測用DNA鏈混合，避光反應(yīng)，測量檢測用DNA鏈的熒光值，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；

5)??將待測樣本液與檢測用DNA鏈混合，避光反應(yīng)，檢測其熒光值，計(jì)算得到硫離子濃度。

優(yōu)選的，還原劑是維生素C或其鹽中的至少一種。

優(yōu)選的，隨機(jī)互補(bǔ)雙鏈DNA序列的長度不小于10?bp。

優(yōu)選的，隨機(jī)互補(bǔ)雙鏈DNA序列的長度為15～35?bp。

優(yōu)選的，二價(jià)銅離子源自硫酸銅、乙酸銅和硝酸銅中的至少一種。

本發(fā)明的有益效果是：