[發明專利]一種丙型肝炎病毒F蛋白的抗原構象表位模擬肽及其應用

無效

• 申請號: 201210075990.6
• 申請日: 2012-03-21
• 公開（公告）號: CN102584952A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 岳明;鄧小昭;魯衛東;孔晶;韋娟;余曉杰;徐孝東;張云;張錦海
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學;中國人民解放軍南京軍區軍事醫學研究所;昆明醫學院
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K19/00;C12N15/51;G01N33/576
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 孫忠浩

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及一種丙型肝炎病毒F蛋白抗原構象表位模擬肽及其應用。

背景技術

國家衛生部2011年12月發布的全國法定傳染病疫情報告顯示，我國28種傳染病中，病毒性肝炎的發病率及死亡率均位居第一。丙型肝炎病毒(hepatitis?C?virus，HCV)是導致輸血性或社區獲得性非甲非乙型肝炎的主要病因，是丙型肝炎的病原體，在世界范圍內的感染率是3％，感染者總計超過1.7億。在我國，約75％的急性丙肝感染者會發展為慢性肝炎，約20％的患者最終發展為肝硬化和肝細胞肝癌等終末期肝病。HCV感染已成為我國乃至世界所面臨的嚴峻的公共衛生難題。

丙型肝炎病毒是單股正鏈RNA病毒，黃病毒科丙肝病毒屬，基因組全長9.6kb，分為5’非翻譯區(UTR)、一個開放閱讀框(ORF)和3’非翻譯區，編碼10個主要蛋白：C、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。由于HCV是RNA病毒，RDRP缺乏校驗性，故HCV變異率高。目前的標準治療方案是聚乙二醇干擾素聯用利巴韋林，但平均應答率不超過50％，至今尚無有效的疫苗和特效治療藥物問市。故亟需對HCV的預防、控制和治療進一步研究。

除了以上10種蛋白之外，HCV基因組還編碼一種F蛋白(Synthesis?of?a?novel?hepatitis?C?virus?protein?by?ribosomal?frameshift.EMBO?J，2001，20(14)：3840-3848)，是HCV基因組C蛋白編碼移位的產物，在自然感染過程中即可出現。研究發現，F蛋白在體外也可以形成與HCV病毒顆粒外形相似的，直徑約35nm的病毒樣顆粒，提示F蛋白可能參與HCV病毒顆粒的形成，在HCV的病毒生命周期中具有重要作用，并參與HCV的病理進程(HCV?F蛋白體外自組裝以及在HCV感染者肝組織中的分布研究。中華實驗和臨床感染病雜志，2007，1(3)：138-139)。在不同臨床類型的丙肝患者中，中重度和肝硬化患者F抗體陽性率最高(Expression?of?hepatitis?C?virus?F?protein?leads?transfected?cell?to?transformation.Journal?of?Nanjing?University(natural?sciences)，2010，46，40-42)；且肝細胞肝癌慢性HCV患者F抗體陽性率高于非肝細胞肝癌慢性HCV患者(High?levels?of?HCV?core+1?antibodies?in?HCV?patients?with?hepatocellular?carcinoma.Journal?ofGeneral?Virology(2011)，92：1343-1351)。以上研究表明，F蛋白抗體可能與丙型肝炎的病情進展和預后有關，對患者體內F蛋白抗體的檢測有助于丙型肝炎的控制和監測。

丙型肝炎病毒的檢測目前主要是針對上述10種結構蛋白或非結構蛋白的ELISA檢測和HCV?RNA定量等等。F蛋白抗體的檢測與HCV的診斷、病情進展和預后有一定相關性，且F蛋白在HCV各種基因型間的同源率高于80％，交叉免疫原性好(CN?101407813B)，故可作為補充手段，加強對HCV控制和監測，具有重要的社會效益和經濟效益。

確定蛋白質或肽類抗原表位常用的方法有肽池測序、肽掃描、定點突變、組合肽庫法等。這些方法需要或者合成大量交疊肽，或者裂解為小肽，或者通過定點突變技術一個個改變氨基酸殘基，再通過多肽結合試驗來測定，而且得到的結果通常是線性表位(藥物生物信息學。化學工業出版社，2004)。研究顯示，蛋白質或多肽刺激機體產生抗體的表位，90％為構象性表位，僅10％為線性表位。因此，確定抗原的空間構象表位對于抗原-抗體的免疫診斷和病毒疫苗和特效性藥物的開發具有更重要的意義(抗原表位預測的免疫信息學方法研究進展。中國免疫學雜志，2008，24：857-861)。