[發明專利]一種用于快速檢測人禽流感病毒的非診斷性雙抗體夾心法

有效

• 申請號: 201210074217.8
• 申請日: 2012-03-20
• 公開（公告）號: CN102621320A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 楊宇;魏蓮;王靜
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

技術領域

本發明具體涉及人禽流感病毒酶聯免疫吸附(ELISA)檢測方法，屬于免疫檢測技術領域。

背景技術

自從1997年在香港發現人類也會感染禽流感之后，此病癥引起全世界衛生組織的高度關注。其后，該病一直在亞洲區零星爆發，但在2003年12月開始，禽流感在東亞多國-主要在越南、韓國、泰國-嚴重爆發，并造成越南多名病人喪生。直到2005年中，疫癥不但未有平息的跡象，而且還不斷擴散。現時遠至東歐多個國家亦有案例。

禽流感是由禽流感病毒引起的烈性人畜共患病。波及范圍之廣，危害程度之深引起了科學家的極大關注，各國投入大量的人力和財力對禽流感進行深入研究，但目前為止還不能完全控制和消除危害，因此對禽流感的檢測預防顯得非常關鍵。目前禽流感檢測技術主要有分子生物學技術和血清學診斷技術，分子生物學檢測方法需要專業理論知識和配套的昂貴實驗儀器，不便于基層對禽流感病毒進行快速簡便的檢測。而ELISA方法具有靈敏度高、可標準化操作和結果易于分析等特點，能夠幫助人們有效的檢測和防控禽流感疫情，是世界衛生組織推薦的檢測禽流感病毒的主要方法之一。

發明內容

針對現有情況存在的問題，本發明的目的在于提供一種靈敏度高、特異性好的用于快速檢測禽流感病毒的雙抗體夾心法。

為實現上述目的，本發明一種用于快速檢測人禽流感病毒的非診斷性雙抗體夾心法，該方法具體為：

1)人工改造合成突變的人禽流感病毒HA基因；

2)設計擴增表達人禽流感病毒HA基因引物；

3)禽流感病毒HA基因的PCR擴增；

4)將目的片段與載體pET100/D-TOPO連接，構建重組質粒；

5)轉化表達細胞；

6)IPTG誘導重組蛋白的表達；

7)重組蛋白免疫小鼠制備單克隆抗體并純化；

8)重組蛋白免疫兔制備兔血清并純化；

9)單克隆抗體用于ELISA包被，制備的多克隆抗體作為檢測抗體，辣根過氧化物酶標記的兔抗IgG作為二抗；

10)建立雙抗體夾心檢測禽流感病毒抗原的方法。

進一步，所述步驟1)中人工改造合成突變的人禽流感病毒HA基因序列為：

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