[發明專利]構建產富馬酸大腸桿菌基因工程菌的方法有效
| 申請號： | 201210074108.6 | 申請日： | 2012-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN102618570A | 公開（公告）日： | 2012-08-01 |
| 發明（設計）人： | 黃和;徐晴;李霜;江凌 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N1/21;C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江蘇致邦律師事務所 32230 | 代理人： | 樊文紅 |
| 地址： | 210009 江蘇省南京*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 構建 產富馬酸 大腸桿菌 基因工程 方法 | ||
1.一種構建產富馬酸大腸桿菌（Escherichia?coli）基因工程菌的方法，以大腸桿菌出發菌株，敲除其TCA循環途徑中編碼的富馬酸酶基因以阻斷富馬酸至蘋果酸的轉化途徑；以及敲除抑制其TCA循環途徑中的TCA循環抑制蛋白基因實現厭氧條件下TCA循環的正常運作，得到可實現厭氧途徑下富馬酸高效積累的產富馬酸大腸桿菌基因工程菌。
2.根據權利要求１所述的構建產富馬酸大腸桿菌基因工程菌的方法，其特征在于還包括以下步驟：敲除富馬酸還原酶基因、丙酮酸甲酸裂解酶基因和乳酸脫氫酶基因中的一種或多種。
3.根據權利要求１所述的構建產富馬酸大腸桿菌基因工程菌的方法，其特征在于所述的敲除其TCA循環途徑中編碼的富馬酸酶基因的方法，包括敲除富馬酸酶基因的完整基因片段，或者敲除富馬酸酶基因的亞基部分。
4.根據權利要求2所述的構建產富馬酸大腸桿菌基因工程菌的方法，其特征在于所述的敲除富馬酸還原酶基因的方法，包括敲除富馬酸還原酶基因的完整基因片段，或者敲除富馬酸還原酶基因的亞基部分。
5.根據權利要求2所述的構建產富馬酸大腸桿菌基因工程菌的方法，其特征在于所述的敲除乳酸脫氫酶基因的方法，包括敲除乳酸脫氫酶基因的完整基因片段，或者敲除乳酸脫氫酶基因的亞基部分。
6.根據權利要求1所述的構建產富馬酸大腸桿菌基因工程菌的方法構建得到的產富馬酸大腸桿菌基因工程菌。
7.根據權利要求1所述的構建產富馬酸大腸桿菌基因工程菌的方法構建得到的產富馬酸大腸桿菌基因工程菌發酵生產富馬酸的方法：按體積比1%接種量將構建得到的產富馬酸大腸桿菌基因工程菌接種入種子培養基進行有氧種子培養，當OD達到3時，按體積比10%的接種量接種至發酵培養基進行厭氧發酵。
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