[發明專利]一種基于量子點均相免疫檢測病毒的方法

有效

• 申請號: 201210073965.4
• 申請日: 2012-03-20
• 公開（公告）號: CN102608090A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 何治柯;陳璐
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種基于量子點和氧化石墨烯均相免疫檢測病毒的方法，其步驟如下：

首先將一定量的不同顏色的鏈霉親和素修飾的量子點溶液分別與不同種類病毒的生物素化抗體混合制備偶聯物，將不同顏色的量子點偶聯物混合后再加入過量氧化石墨烯使量子點的熒光被猝滅，再加入與抗體相對應的病毒后，量子點的熒光分別回升，然后根據不同顏色量子點的熒光強度是否回升對病毒種類進行定性識別，或根據量子點的熒光強度回升強度值對病毒含量進行定量檢測，或在紫外分析儀中用紫外燈激發樣品溶液進行拍照，得到可視化的圖片，通過顏色變化對病毒進行半定量檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，其步驟如下：

(1)將鏈霉親和素修飾的量子點溶解于15mM?pH?8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，得到濃度為1.0×10^-11-1.0×10^-9mol/L的鏈霉親和素修飾的量子點反應液；

所述鏈霉親和素修飾的量子點為SA-CdSe、SA-CdTe、SA-CdSe/ZnS、SA-CdTe/ZnS、SA-CdTe/CdS/ZnS、SA-CdSe/CdS/ZnS、SA-CdSe:Mn²⁺、SA-CdTe:Mn²⁺、SA-CdSe:Zn²⁺或SA-CdTe:Zn²⁺；

(2)將步驟(1)得到的鏈霉親和素修飾的量子點反應液與生物素化病毒單克隆抗體按照量子點與抗體摩爾比30∶1進行偶聯反應，得偶聯物反應液B；

(3)向反應液B中加入過量的熒光猝滅劑氧化石墨烯，使氧化石墨烯的終濃度為10ng/mL，得到反應液D；

(4)以激發波長280～480nm激發，測定反應液D在發射波長350～700nm處的熒光強度，得到量子點被氧化石墨烯猝滅后的熒光強度；

(5)加入不同濃度的與步驟(2)中生物素化病毒單克隆抗體相對應的病毒于反應液D中，以相同的激發波長激發，測量其在同一發射波長處的熒光強度；

所述病毒為人體腸道病毒EV71、SARS病毒、禽流感病毒、炭疽病毒、艾滋病病毒、出血熱病毒、乙肝病毒或柯薩奇B3病毒；

(6)將量子點的熒光強度回升值對應于病毒濃度作圖，得到定量檢測病毒的工作曲線；或將比色皿或比色管放置于紫外分析儀中，用紫外燈激發樣品溶液，觀察到不同顏色，用數碼相機拍照，通過溶液顏色變化對病毒進行半定量檢測。