[發明專利]一種輔助鑒定大豆對大豆花葉病毒抗性的方法

無效

• 申請號: 201210073913.7
• 申請日: 2012-03-20
• 公開（公告）號: CN103320427A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 趙雪;滕衛麗;韓英鵬;李文濱;李永光;李冬梅;朱聃
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種輔助鑒定大豆對大豆花葉病毒抗性的方法。

背景技術

大豆(Glycine?max)原產于中國，是重要的經濟作物。大豆花葉病毒(soybean?mosaic?virus，SMV)引起的病害是危害大豆生產的主要病害之一，嚴重影響大豆產量和品質。培育抗病品種是目前控制SMV流行最有效方法。東北大豆產區SMV的優勢毒株為N1株系和N3株系。利用分子標記技術定位與N1株系抗性和N3株系抗性相關基因和緊密連鎖的分子標記有益于分子輔助選擇抗性大豆品種的育種實踐。

劉麗君等(2002)利用黑農39×合豐25的F2群體，篩選出共顯性RAPD標記OPN1400/1300，與黑農39抗病基因的遺傳距離為8.2cM。理論上，與抗病基因的遺傳距離小于5cM的分子標記才具有分子輔助選擇的應用價值，以往的研究結果所得到的標記-基因遺傳距離較遠，應用范圍較小。因此，縮小抗病位點的遺傳距離，尋找與抗病位點緊密連鎖的分子標記對于提高分子輔助選擇的效力具有十分重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種輔助鑒定大豆對大豆花葉病毒抗性的方法。

本發明保護序列表的序列1所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段組成的引物對甲。

本發明還保護引物組合物，包括所述引物對甲。

所述引物組合物(引物組合物I)還可包括引物對乙；所述引物對乙由序列表的序列3所示DNA片段和序列表的序列4所示DNA片段組成。所述引物組合物具體可由所述引物對甲和所述引物對乙組成。

所述引物組合物(引物組合物II)還包括引物對丙；所述引物對丙由序列表的序列5所示DNA片段和序列表的序列6所示DNA片段組成。所述引物組合物具體可由所述引物對甲和所述引物對丙組成。

所述引物組合物(引物組合物III)還可包括所述引物對乙和所述引物對丙。所述引物組合物具體可由所述引物對甲、所述引物對乙和所述引物對丙組成。

所述引物對甲可用于如下(a)或(b)：

(a)輔助鑒定大豆對大豆花葉病毒的抗性；

(b)輔助篩選抗大豆花葉病毒的大豆。

所述應用具體可采用如下方法：以待測大豆的基因組DNA為模板，用所述引物對甲進行PCR擴增；將PCR擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳并銀染顯色，如果待測大豆在100bp在250bp之間具有與抗病大豆一致的帶型(顯示一條約150bp的特異條帶)、待測大豆為候選的抗大豆花葉病毒大豆，如果待測大豆在100bp在250bp之間具有與感病大豆一致的帶型(即顯示一條約170bp的特異條帶)，待測為候選的感大豆花葉病毒大豆。

所述抗病大豆具體可為東農93-046。所述感病大豆具體可為conrad。所述大豆花葉病毒為SMV-N1株系或SMV-N3株系。

所述引物組合物I可用于如下(c)或(d)：

(c)輔助鑒定大豆對大豆花葉病毒的抗性；

(d)輔助篩選抗大豆花葉病毒的大豆。

所述應用具體可采用如下方法(方法甲)：以待測大豆的基因組DNA為模板，用所述引物對甲進行PCR擴增；將PCR擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳并銀染顯色，如果待測大豆在100bp在250bp之間具有與抗病大豆一致的帶型(顯示一條約150bp的特異條帶)、待測大豆為候選的抗大豆花葉病毒大豆，如果待測大豆在100bp在250bp之間具有與感病大豆一致的帶型(即顯示一條約170bp的特異條帶)，待測大豆為候選的感大豆花葉病毒大豆。

所述應用還可包括如下方法(方法乙)：以待測大豆的基因組DNA為模板，用所述引物對乙進行PCR擴增，采用Lightscanner?HRM高分辨率熔解曲線突變檢測/基因分型分析系統(Idaho公司)對PCR擴增產物進行分析，如果顯示與抗病大豆一致的擴增曲線、待測大豆為候選的抗大豆花葉病毒大豆，如果顯示與感病大豆一致的擴增曲線，待測大豆為候選的感大豆花葉病毒大豆。

方法乙可作為對方法甲的進一步驗證。

所述抗病大豆具體可為東農93-046。所述感病大豆具體可為conrad。所述大豆花葉病毒為SMV-N1株系。

所述引物組合物II可用于如下(e)或(f)：

(e)輔助鑒定大豆對大豆花葉病毒的抗性；

(f)輔助篩選抗大豆花葉病毒的大豆。