[發明專利]一種雞新城疫-雞傳染性支氣管炎病毒液的制備方法

無效

• 申請號: 201210071017.7
• 申請日: 2012-03-19
• 公開（公告）號: CN102580080A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 劉建;陳利紅;楊旭;黃娜
• 申請（專利權）人: 天津瑞普高科生物藥業有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/215;A61K39/17;A61P31/14
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技術領域

本發明涉及一種用于制備禽用疫苗的病毒液的制備方法，尤其是一種雞新城疫-雞傳染性支氣管炎病毒液的制備方法。

背景技術

雞新城疫(ND)及雞傳染性支氣管炎(IB)目前仍然是危害我國養雞業的主要傳染病，具有傳播迅速、危害大的特點，能引起急性高度接觸性疾病。在養禽業趨于集約化、工業化的高密度飼養方式之后，為了預防雞新城疫及雞傳染性支氣管炎的發生，對疫苗的要求也更高，這兩類疾病的防控已引起業內極大的重視。

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一種禽類急性、高度接觸性傳染病，被國際獸醫局定為A類烈性傳染病。該病自1926年首次發現于印尼，同年發現與英國新城，因此命名為新城疫。雞新城疫廣泛分布于世界上許多國家，禽類動物極易感染，其中以雞的感受性最強，能引起一種急性、發熱性的傳染病，發病率和死亡率都很高，是嚴重危害養雞業的重要疾病之一，造成很大的經濟損失。雞新城疫病毒是副粘病毒科副粘病毒屬中的一個具有代表性的種，對外界環境的抵抗力較強，病毒對低溫的抵抗力強，在4℃可存活數天，-20℃存活數周，-70℃時數年仍保存感染力。55℃作用45min和直射陽光下作用30min才能使病毒滅活。在新城疫爆發后8周內仍可從雞舍、羽毛、蛋巢分離出病毒。

雞傳染性支氣管炎(IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種高度接觸傳染的疾病，主要侵害雞的呼吸系統、泌尿生殖系統和消化系統。雛雞發病后通常表現流鼻液、呼吸困難等呼吸道癥狀，甚至會發生死亡；此外，該病還可導致蛋雞產蛋量下降和蛋白品質下降。該病目前在世界大多數養雞地區都有發現，我國于1972年由鄺榮祿教授在廣東首先報道了該病的存在，現已蔓延至全國各地，給家禽養殖業造成重大的經濟損失。

隨著禽類養殖業的迅速發展，疾病的發生也日益趨向與復雜化。雞新城疫和雞傳染性支氣管炎在養雞生產中發病率較高，危害尤為嚴重。免疫接種是預防該病的重要措施，但由于疫苗接種時母源抗體過高，或者疫苗質量和保存不當，免疫接種程序不合理等原因會造成雞群免疫狀態的差異，抵抗水平低的免疫雞群不能抵抗強毒的侵襲，引起疾病的傳播。

禽用疫苗及預防技術的研究受到廣泛的關注，疫苗的免疫反應，簡化的免疫程序、簡單的制苗生產工藝、更低的疫苗生產及使用成本等問題成為關注的重點，禽用疫苗的制備工藝也在隨之不斷發展中。

目前已有雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯疫苗，用于這兩種疾病的防控。在雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯疫苗制備過程中，須首先將兩種病毒在雞胚中增殖培養，病毒效價達到標準要求后，收獲得雞新城疫和雞傳染性支氣管炎的病毒液，即制苗用毒液，之后進行相應的制劑手段制苗，獲得二聯疫苗。

傳統的雞新城疫-雞傳染性支氣管炎病毒液的制備工藝是將兩種毒種適當稀釋后，分別接種雞胚，分別收獲雞胚液后按照一定比例混合，制劑，得到二聯疫苗。這樣病毒的繁殖效果達標，但工藝復雜，原材料使用量大。

目前，也有研究分別將NDV和IBV稀釋后混合，一次性同胚接種，經過孵化、收獲雞胚液得到雞新城疫-雞傳染性支氣管炎病毒液。這種同胚增殖的技術，通過調整病毒的接種量及收毒時間，試圖使兩種病毒的增殖均達到最佳狀態。

但是，由于雞傳染性支氣管炎病毒的生長會明顯抑制雞新城疫病毒的繁殖，同時，繁殖過程中兩者之間存在相互干擾現象。在實際生產和應用中，同胚增殖如果是同時一步接種，必然會造成IBV和NDV的繁殖不理想，影響疫苗的質量和免疫效果。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，通過一種將雞新城疫病毒與雞傳染性支氣管炎病毒先后分兩步接種同一雞胚的方法(簡稱“同胚雙毒兩步接種法”)，在制苗過程中選擇適當的接種濃度和收獲時間，有效地減少IBV和NDV之間的干擾，使兩種病毒均能得到充分的增殖。

為了解決上述問題，本發明采用的技術方案是，一種雞新城疫-雞傳染性支氣管炎病毒液的制備方法，包括以下步驟；

(1)分別取雞新城疫毒種和雞傳染性支氣管炎毒種，用滅菌生理鹽水適當稀釋；

(2)取十日齡無特異抗體的雞胚，每胚接種雞新城疫毒種稀釋液0.1ml，37℃孵育24小時后，再向雞胚中接種雞傳染性支氣管炎毒種稀釋液0.1ml，密封針孔；

(3)繼續37℃孵育96小時。孵育過程中，60小時以前每24小時照胚一次，死亡的雞胚棄去，60小時后每6小時照胚一次，死亡的雞胚隨時取出，置于2-8℃冷藏保存，直至96小時后，不論雞胚死亡與否，全部取出，置于2-8℃冷卻4-24小時，無菌收獲胎兒病變明顯的雞胚液，既得雞新城疫-傳染性支氣管炎病毒液。