[發明專利]一種無需裂解高效提取發酵細菌中外源表達蛋白的方法無效
| 申請號： | 201210070447.7 | 申請日： | 2012-04-14 |
| 公開（公告）號： | CN102617703A | 公開（公告）日： | 2012-08-01 |
| 發明（設計）人： | 龍泉;楊艷坤;張芃芃;楊冬;劉冰 | 申請（專利權）人： | 拜明(蘇州)生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K1/14 | 分類號： | C07K1/14;C12N9/12;C07K16/40 |
| 代理公司： | 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234 | 代理人： | 張利強 |
| 地址： | 215123 江蘇省蘇州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 無需 裂解 高效 提取 發酵 細菌 中外 表達 蛋白 方法 | ||
1.一種無需裂解高效提取發酵細菌中外源表達蛋白的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）制備緩沖液：將乙二胺四乙酸鈉1.0mmol-?500mmol、尿素1.0mol-?10.0mol、蔗糖0.1mmol-?5mmol、Tris堿10-100mmol/L，均勻混合。
2.加入蒸餾水至950ml，室溫下攪拌30min至液體澄清，使用Tris-Base或Tris-HCl緩沖體系調整溶液的pH值到5-8?，繼續加入蒸餾水至1L，120℃高壓滅菌20min;
（2）將發酵細菌菌液高速離心10?-?60min，離心速度為：6000-?10000g，?離心溫度為4℃，留取上清液，用于下游純化；
（3）將離心沉積物，懸浮于緩沖液中形成混合液，將混合液在4-25℃下溫和攪拌5-?60min,??24小時后，在4-20℃下，靜置1-?24h，備用;
（4）將步驟（3）的發酵細菌菌液高速離心10-60min，離心速度為：6000g?-?10000g，?4℃；留取上清液體，合并步驟（2）中的上清液，作為合成蛋白產物進行下游純化。
3.根據權利要求1所述的無需裂解高效提取發酵細菌中外源表達蛋白的方法，其特征在于，所述的緩沖液的組成為：乙二胺四乙酸鈉1.0mmol-?500mmol、尿素1.0mol-?10.0mol、蔗糖0.1mmol-?5mmol、Tris堿10-100mmol?和水0.9-1L。
4.根據權利要求1所述的無需裂解高效提取發酵細菌中外源表達蛋白的方法，其特征在于，所述的步驟（3）中，沉積物與緩沖液的混合比例為1:5?-5:1。
5.根據權利要求1所述的無需裂解高效提取發酵細菌中外源表達蛋白的方法，其特征在于，所述的細菌為外源蛋白表達的革蘭氏陰性菌。
6.根據權利要求4所述的無需裂解高效提取發酵細菌中外源表達蛋白的方法，其特征在于，所述的細菌為大腸桿菌及其亞種。
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