[發明專利]燕窩酶聯免疫試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201210069741.6
• 申請日: 2012-03-16
• 公開（公告）號: CN102621329A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 張世偉;楊國武;賴心田;劉小青;李蕓;陳血劍;嚴瓊英;陳薇;陳國培;陳雁;葉秀玲
• 申請（專利權）人: 深圳市計量質量檢測研究院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所 44248
• 代理人: 胡吉科;王雨時

技術領域

本發明涉及燕窩及其相關產品的檢測，尤其涉及一種燕窩酶聯免疫試劑盒及其檢測方法。

背景技術

燕窩是由雨燕科金絲燕及同屬類的唾液或者絨羽等混唾液凝結而成的巢窩，其產地分布于東南亞一帶，如中國、印尼、泰國、越南和馬來西亞等。燕窩是一種名貴中藥，具有養陰潤燥，補中益氣，入胃補脾，化痰止咳等功能；燕窩含有豐富的活性糖蛋白，鈣、鐵、磷、碘及維生素等天然營養物和礦物質，還具有的防止流感病毒，促進細胞生長和加強免疫系統功能等作用。由于燕窩的營養價值和經濟價值均較高，而且消費者對其需求日益增長，因此一些商販通過染色、漂白，或以銀耳、豬皮、瓊脂、果膠等摻假偽造。假冒偽劣的燕窩及其制品頻繁被曝光，而檢測燕窩及其相關產品的標準方法尚屬空白，因此，為保障消費者的合法權益和生命健康，完善市場秩序，完善燕窩及其相關產品的檢測方法迫在眉睫。

現有的燕窩及其相關產品檢測方法主要有：

（1）PCR方法：利用燕窩中特定基因片段進行PCR檢測，該方法特異性好；但無法做到定量檢測，而且燕窩制成品往往需要熱加工，容易導致樣品中DNA降解，從而使檢測結果出現假陰性；

（2）電泳方法：基于燕窩蛋白質圖譜進行分析，但抗基質干擾能力差，靈敏度低，僅限于對燕盞進行檢測，無法用于燕窩制成品的檢測；

（3）特定組份分析法：利用色譜、光譜等手段，通過分析燕窩中各種化學組份如特定元素、氨基酸、唾液酸、糖類等的含量鑒定其真假，但其特異性不高，易于被人為添加物干擾。

因此，現有的檢測技術存在特異性不強，容易受人為添加物的干擾，無法進行定量分析，適用范圍窄，無法對燕窩含量不高、需高溫加工且基質干擾較大的燕窩制成品進行有效的檢測，檢測操作繁瑣，檢測時間長，需要配備大型分析儀器且要求專業的操作人員等缺點。

發明內容

為解決現有技術中存在的問題，發明人預料不到地發現，通過提取唾液酸糖蛋白作為抗原，制備高度特異的抗燕窩唾液酸糖蛋白抗體，構建的酶聯免疫試劑盒可廣泛應用于燕窩及其相關產品的檢測，且具有特異性好，靈敏度高，抗基質干擾效果好，可進行定量檢測，檢測結果準確性好，操作簡單、快捷，檢測成本低等優點。

本發明提供一種燕窩酶聯免疫試劑盒，包括唾液酸糖蛋白標準液、抗唾液酸糖蛋白抗體、酶標二抗、酶標板和底物顯色液。上述試劑均以工作液的形式提供，其中唾液酸糖蛋白標準液包括系列梯度濃度的唾液酸糖蛋白標準液，有利于減少使用者的實驗步驟，從而減小誤差。

采用上述技術方案，可對燕窩及其相關產品進行高通量的定量檢測，使用方便，特異性好，靈敏度高，抗基質干擾效果好，檢測成本低。

作為本發明的進一步改進，所述酶標二抗采用羊抗鼠IgG-HRP，購自武漢博士德，使用0.01M?pH7.4的PBS以1:10000稀釋配成酶標二抗工作液。

作為本發明的進一步改進，所述酶標板包被了唾液酸糖蛋白抗原。所述酶標板通過將唾液酸糖蛋白抗原加入高吸附酶標板，包被過夜，5%脫脂奶粉封閉后真空干燥獲得。此外，也可將抗唾液酸糖蛋白抗體加入高吸附酶標板，包被過夜，5%脫脂奶粉封閉后真空干燥獲得包被了抗唾液酸糖蛋白抗體的酶標板。

作為本發明的進一步改進，所述底物顯色液由顯色劑A和顯色劑B組成，所述顯色劑A采用雙氧水，所述顯色劑B采用四甲基聯苯胺。

作為本發明的進一步改進，燕窩酶聯免疫試劑盒還包括洗滌液、稀釋液和終止液，所述洗滌液為pH7.4?的PBST（由PBS中加入吐溫-20獲得），所述稀釋液為pH7.4?的PBS，所述終止液采用硫酸，上述試劑均以工作液的形式提供，可方便地進行現場檢測和大量樣本的篩查，也利于提供檢測結果的準確性。

本發明還提供燕窩酶聯免疫試劑盒的檢測方法，包括如下步驟：

A）?樣品前處理：將樣品均質，加入PBS超聲提取，離心，取上清液稀釋后得到樣品溶液；

B）?往包被了唾液酸糖蛋白抗原的酶標板的相應微孔中加入系列梯度濃度的唾液酸糖蛋白標準液或樣品溶液，加入抗唾液酸糖蛋白抗體，孵育后洗滌、拍干，加入酶標二抗，孵育后洗滌、拍干，加入底物顯色液，孵育后加入終止液，用酶標儀測定OD值；

C）?建立標準曲線，對樣品溶液的檢測結果進行分析。