[發(fā)明專利]一種利用膨脹床富集分離螺旋藻藻藍(lán)蛋白的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210069200.3
• 申請日: 2012-03-16
• 公開（公告）號: CN103304649A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王峰;郭靜;高志剛
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué);大豐市賜百年生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/405
• 分類號: C07K14/405;C07K1/16
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1.一種利用膨脹床富集分離螺旋藻藻藍(lán)蛋白的方法，其特征在于步驟為：螺旋藻破壁液的制備；JDN-8微球在膨脹床中富集螺旋藻破壁液中的藻藍(lán)蛋白；用破壁提取劑從膨脹床中洗出細(xì)胞碎片和其它雜質(zhì)；洗脫分離藻藍(lán)蛋白；洗脫液經(jīng)冷凍干燥，最終獲得一定純度的藻藍(lán)蛋白。

(1)螺旋藻破壁液的制備：用水或磷酸緩沖液作提取劑，磷酸緩沖液的濃度為25～100mmol/L，藻粉或鮮藻與提取液的固液比為1∶50～1∶150，攪拌均勻后，置于-10℃～-20℃下冷凍一定時間后，37℃融解，如此反復(fù)凍融4-6次，融化后獲得的破壁液；

(2)JDN-8微球在膨脹床中膨脹富集破壁液中的藻藍(lán)蛋白：在400mm×16mm玻璃柱內(nèi)(液體分布器為200目絲網(wǎng))加入10g的JDN-8微球，從柱底注入提取劑，使微球上浮形成膨脹床，微球床層的膨脹率為1.5～3.0，微球膨脹床層穩(wěn)定20分鐘后，在柱底將提取劑迅速切換為螺旋藻破壁液注入，破壁液的蛋白質(zhì)濃度為0.2～0.5mg/ml，當(dāng)柱頂流出液的蛋白質(zhì)濃度為柱底注入破壁液的蛋白質(zhì)濃度的70～80％時，膨脹床中JDN-8微球的吸附量達(dá)到飽和，停止注入破壁液；。

(3)用破壁提取劑從膨脹床中洗出細(xì)胞碎片和其它雜質(zhì)：在飽和吸附藻藍(lán)蛋白后，將JDN-8微球膨脹床的注入流體從破壁液迅速切換成提取液，微球床層的膨脹率與步驟2中相同，沖洗去除柱中的細(xì)胞碎片和其它雜質(zhì)，直到柱頂流出液在550nm處的吸光度值A(chǔ)₅₅₀等于零；

(4)洗脫分離藻藍(lán)蛋白：將去除細(xì)胞碎片和其它雜質(zhì)的膨脹床靜置，使床中的JDN-8微球自然沉降，將多余的液體放出，使液面剛好與柱床表面一致。從柱頂注入pH值為7.0、濃度為500～1000mmol/L的磷酸緩沖液，流速為20～100ml/min，從JDN-8型微球上洗脫收集富含藻藍(lán)蛋白的洗脫液段；

(5)冷凍干燥：將收集的藻藍(lán)蛋白的洗脫液冷凍干燥，得到純度A₆₂₀/A₂₈₀＞2.0的藻藍(lán)蛋白粉末。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的螺旋藻藻藍(lán)蛋白的富集分離方法，其特征在于采用以JDN-8微球為吸附載體的膨脹床技術(shù)直接處理螺旋藻凍融破壁液，無需去除破壁液中細(xì)胞碎片和其它雜質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的螺旋藻藻藍(lán)蛋白的富集分離方法，其特征在于JDN-3型樹脂制備：在容器中，放入納米氧化鎂顆粒、丙烯酸水溶液和大豆油，納米氧化鎂顆粒與大豆油的總量比為1∶10～20，丙烯酸水溶液中丙烯酸的濃度為20～70％，丙烯酸水溶液與大豆油的體積比例為1∶1～2，用Fluko?FA25型均質(zhì)泵分散乳化，加入0.2～0.5％的過硫酸鈉(以水相體積計)，于30℃～40℃下在100～200r/min攪拌轉(zhuǎn)速下攪拌2小時，過濾得到50～500nm粒徑分布的JDN-8微球。