[發(fā)明專利]一種復(fù)合酶-熱水浸提黃柏生物堿的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210068436.5
• 申請日: 2012-03-15
• 公開（公告）號: CN102626459A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 文洪宇;成建國;李洪;黃彥;張?zhí)?/a>;楊娟;張雪梅;陳曦
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市中醫(yī)院
• 主分類號: A61K36/756
• 分類號: A61K36/756;A61P9/06;A61P9/12;A61P1/04;A61P37/04;A61P31/00;A61K129/00
• 代理公司: 重慶華科專利事務(wù)所 50123
• 代理人: 康海燕

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥制藥或原料加工領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)合酶法提取黃柏生物堿的方法。

背景技術(shù)

黃柏為蕓香科植物黃皮樹Phellodendron?chinense?Schneid.的干燥樹皮及蕓香科植物黃薜Phellodendron?amurense?Rupr.的樹皮。是一種用途廣,用量大的中藥材。黃柏臨床用于濕熱瀉痢、黃疸、帶下、熱淋、腳氣、痿躄、骨蒸勞熱、盜汗、遺精、瘡瘍腫毒、濕疹瘙癢。藥理研究表明，黃柏具有調(diào)整心律、降血壓、抗消化道潰瘍、增強免疫系統(tǒng)和抗病原微生物等作用。黃柏含小檗堿(berberine)、木蘭花堿(magnoflorine)、黃柏堿(phellodendrine)、掌葉防己堿(palmatine)，藥根堿（Jatrorrhizine）等多種生物堿及內(nèi)酯、甾醇、粘液質(zhì)等。黃柏生物堿作為黃柏的主要有效成分，對其應(yīng)用研究越來越廣泛。

目前，黃柏生物堿的提取方法主要有酸水法、石灰乳法、乙醇法、超聲波提取等，生物堿為黃柏主要有效成分,?如小檗堿、黃柏堿、木蘭花堿、掌葉防己堿、藥根堿等，均為季銨生物堿，雖都為水溶性生物堿，采用熱水提法，由于黃柏皮性質(zhì)堅韌，溶劑無法穿透進入纖維素內(nèi)部，制劑中提取含量不高；另一方面，黃柏粘液含量7%～8%，粘液通常為具有分支結(jié)構(gòu)的雜多糖,?與纖維素等同屬多糖類，黃柏提取物中含粘液質(zhì)制成的中藥膠囊，崩解時限不合格,?現(xiàn)有技術(shù)采用石灰乳祛除黏液質(zhì),?但過濾的時間長，生物堿得率較低，而采用酸堿浸提、半仿生提取等可能會破壞其活性結(jié)構(gòu)。

考慮黃柏中生物堿的狀態(tài)和性質(zhì),特別是幾種生物堿分解點都特別低，隨著溫度增加，小檗堿轉(zhuǎn)化為小檗紅堿等特性，我們認為酶處理可提高藥效成分提取率，有助于保持天然產(chǎn)物構(gòu)象，保持成分原有性質(zhì)，也是仿生化提取中藥有效成分的一種方式，克服傳統(tǒng)高溫煎煮對活性成分的影響，提取溫度接近人體溫度，水解條件溫和，操作簡便易行，設(shè)備簡單。用復(fù)合酶澄清提取黃柏，符合中醫(yī)藥理論，故我們采用復(fù)合酶-熱水浸提黃柏生物堿。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要目的是提供一種簡單易行，提取分離速度快，成本低，效率高，適于大規(guī)模生產(chǎn)的黃柏生物堿有效部位提取工藝。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種復(fù)合酶-熱水浸提黃柏生物堿的方法，所述方法是將黃柏藥材用復(fù)合酶酶解，具體步驟如下：

（1）將檢驗合格的黃柏原生藥飲片粉碎成粗粉，備用；

（2）稱取處方量黃柏粗粉，加15倍重量的水浸潤，調(diào)溫度30℃～40℃,?pH為3.9～4.5；

（3）另取復(fù)合酶加水10倍重量調(diào)勻，緩緩加入黃柏水浸液中，攪勻，保溫160～200min,?過濾，濾液備用；所述復(fù)合酶為每g黃柏取相當(dāng)于酶活力0.8～1萬U的纖維素酶、1.5～2.5萬U的果膠酶,?和?0.3～0.5萬U的半纖維素酶的混合物；

（4）將黃柏藥渣繼續(xù)加10倍重量的水，煎煮1h，過濾；

（5）將步驟（3）和（4）的濾液合并，滅酶，濃縮至規(guī)定量（相當(dāng)于生藥1g/ml），即得黃柏生物堿提取物。

如上所述的方法，其中，所述的復(fù)合酶為纖維素酶、果膠酶和半纖維素酶混合物，所述復(fù)合酶較優(yōu)的可以由以下組料組成：每g黃柏取相當(dāng)于酶活力0.8～1萬U的纖維素酶,??1.5～2.5萬U的果膠酶,?0.3～0.5萬U的半纖維素酶。

如上所述的方法，其中，所述復(fù)合酶的酶活測定方法：纖維素酶在35℃、pH4條件下,?1ｈ分解羧甲基纖維素鈉生成1ｍｇ還原糖（以葡萄糖計）所需的酶量為一個纖維素酶活力單位，即1U；果膠酶在35℃、pH4條件下,?1ｈ分解果膠生成1ｍｇ半乳糖醛酸的酶量為一個果膠酶活力單位，即1U；半纖維素酶在35℃pH4條件下,?1h分解木聚糖產(chǎn)生1mg還原糖(以木糖計)的酶量定義為一個半纖維素酶活力單位，即1U。

如上所述的方法，其中，pH值以0.5%稀硫酸、5%Ca(OH)₂水溶液調(diào)節(jié)。

可見，本方法包括酶促浸提和滅酶濃縮兩個階段。第一階段主要作用是酶解細胞表面纖維、半纖維木質(zhì)結(jié)構(gòu)及粘液物,熱水浸提利于生物堿的分離、溶出；第二階段通過加熱，既具有滅酶活的作用，同時又濃縮藥材至規(guī)定量。