[發明專利]一種表達IL-17的膠質瘤細胞株

無效

• 申請號: 201210068330.5
• 申請日: 2012-03-15
• 公開（公告）號: CN102634485A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 胡錦輝;姜寧;王國增;鄭景存
• 申請（專利權）人: 上海市浦東新區公利醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所 31251
• 代理人: 王建國

技術領域

本發明涉及一種表達IL-17的膠質瘤細胞株，具體涉及表達IL-17的膠質瘤細胞株pEGFP-N1-IL-17-U87MG。本發明屬于基因工程領域，具體來說，涉及基因重組細胞領域。

背景技術

IL-17是新近發現的免疫細胞亞群Th17的標記分子，其最初通過活化的淋巴細胞庫消減雜交鑒定，且被命名為CTLA-8(細胞毒性T淋巴細胞相關抗原8)。

IL-17被證實與多種病理過程相關，如自身免疫、感染、過敏、排斥反應的。研究表明，IL-17可以激活NF-κB、MAKP-ERK等多條信號途徑，通過促進炎癥因子、趨化因子、抗菌肽、組織重構分子、基質金屬蛋白酶分子的表達，介導多方面的生物學活性。

同時，IL-17也被證明與多種腫瘤相關，目前IL-17被證實至少可以通過以下途徑促進腫瘤：

1)上調VEGF、CD31等因子表達，從而促進血管增生，加速腫瘤生長；2)上調IL-6，STAT3信號途徑促進腫瘤進展；3)下調Th1表面IL-12Rβ2分子表達，從而下調Th1細胞功能，抵抗有效腫瘤免疫；4)使CD8+細胞共表達IL-17，從而失去細胞毒效應，抗凋亡。

盡管已證實IL-17與多種促進腫瘤的途徑相關，但它在腫瘤細胞微環境中的具體作用途徑、靶點仍需將進一步研究闡明，以期能夠將其作為臨床治療腫瘤疾病的干預靶點。

目前相關研究人員常以IL-17作為外源物質加入腫瘤細胞培養體系中或者是將IL-17短期表達于腫瘤細胞中作為研究IL-17在腫瘤細胞微環境中的具體作用途徑、靶點的一個手段；然而這些方法不但不能很直觀地觀察到攜帶有IL-17的作用位點，同時也影響對IL-17在腫瘤微環境中作用的深入研究。

因此，發明人希望能夠建立一種表達IL-17的腫瘤細胞株，為研究IL-17的促進腫瘤形成的作用機制提供適宜的研究模型材料。

發明內容

本發明一方面提供了一種膠質瘤細胞株，該細胞株為含有編碼IL-17基因的U87MG膠質瘤細胞株，所述的IL-17為免疫細胞亞群Th17的標記分子。

本發明另一方面提供了一種制備上述膠質瘤細胞株的方法，該方法包括以下步驟：首先將所述IL-17基因的cDNA與19-T載體連接構建19-T-IL-17載體；再構建pEGFP-N1-IL-17真核載體；將構建的pEGFP-N1-IL-17真核載體轉染U87MG膠質瘤細胞株；篩選成功轉染了pEGFP-N1-IL-17真核載體的U87MG細胞株并鑒定。

本發明的表達IL-17的膠質瘤細胞株，可用于膠質瘤研究動物模型中，用于觀察穩定表達IL-17狀態下膠質瘤細胞的成瘤情況，同時可通過熒光標簽實時觀察到膠質瘤細胞在動物模型體內位置，為研究IL-17在膠質瘤發生、發展中的作用提供了基礎。

附圖說明

圖1為IL-17cDNA的PCR擴增產物電泳圖譜；

圖2為鑒定19-T-IL-17載體的電泳圖譜；

圖3為鑒定19-T-IL-17載體的測序圖譜；

圖4為鑒定pEGFP-N1-IL-17真核載體的電泳圖譜；

圖5為鑒定pEGFP-N1-IL-17真核載體的測序圖譜；

圖6為熒光顯微鏡觀察結果；

圖7為定量PCR方法檢測pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG培養細胞IL-17mRNA濃度的對比結果；

圖8為ELISA方法檢測pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG培養細胞的IL-17表達水平的對比結果。

圖9為pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG三細胞株注射裸鼠后在39天時成瘤圖；

圖10為定量PCR方法檢測pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG成瘤細胞中IL-17mRNA濃度的對比結果。

具體實施方式

制備表達IL-17的膠質瘤細胞株pEGFP-N1-IL-17-U87MG

步驟一：IL-17cDNA合成