[發明專利]一種檢測諾沃克病毒核苷酸的引物、探針及方法

無效

• 申請號: 201210068112.1
• 申請日: 2012-03-15
• 公開（公告）號: CN102605103A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 邱楊;黃偉;盧小雨;劉建麗;余以剛;陳進會;趙麗
• 申請（專利權）人: 東莞出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術中心;深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種檢測諾沃克病毒核苷酸的引物，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?No.1，SEQ?ID?No.2所示。

2.一種檢測諾沃克病毒核苷酸的探針，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?No.3所示；該探針的5’端標記有報告熒光染料，3’端標記有淬滅熒光染料。

3.根據權利要求2所述一種檢測諾沃克病毒核苷酸的探針，其特征在于，所述報告熒光染料為FAM、HEX、TET、JOE、VIC、FITC、CY3或CY5，所述淬滅熒光染料為TAMRA、ROX、DABCY1、BHQ?1或BHQ2。

4.一種檢測諾沃克病毒核苷酸的方法，其特征在于，該方法以樣品RNA為模板，利用權利要求1所述的引物以及權利要求2所述的探針進行實時熒光RT-PCR擴增，每個循環結束采集數據，反應結束后，若出現諾沃克病毒特異性熒光擴增曲線則判定樣品RNA中含有諾沃克病毒核苷酸。

5.根據權利要求4所述一種檢測諾沃克病毒核苷酸的方法，其特征在于，所述實時熒光RT-PCR擴增的反應體系如下：2.5μL?10×One?Step?RNA?PCR?Buffer，終濃度為0.4mM的dNTP，終濃度為400μM的引物，終濃度為200μM的探針，終濃度為2.5U的Taq酶，終濃度為20U的RNase?Inhibitor，終濃度為2.5U的AMV?RTase?XL，5μL樣品RNA，10.5μL?RNase?Free?dH₂O。

6.根據權利要求4所述一種檢測諾沃克病毒核苷酸的方法，其特征在于，所述實時熒光RT-PCR擴增的反應條件如下：50℃反轉錄20min；95℃變性3min；以95℃5s，60℃40s擴增45個循環。