[發明專利]一種制備纖細薯蕷皂苷的方法及其用途

有效

• 申請號: 201210066572.0
• 申請日: 2012-03-14
• 公開（公告）號: CN102617698A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 梅雙喜;蘇梅;何雷;吳德松;崔濤;朱兆云;王京昆;孫敏
• 申請（專利權）人: 云南省藥物研究所
• 主分類號: C07J71/00
• 分類號: C07J71/00;A61K31/7048;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及一種制備纖細薯蕷皂苷的方法，以及其制劑在抗腫瘤方面的應用，屬于醫藥領域。?

背景技術

纖細薯蕷皂苷為一甾體皂苷類天然化合物，1954年由日本學者Tsukamoto?Takeo等首先從薯蕷科薯蕷屬植物纖細薯蕷(Dioscorea?gracillima)中提取分離得到。之后不斷有學者從薯蕷科薯蕷屬、百合科重樓屬、百合科閉鞘姜屬、百合科黃精姜屬等其它科屬植物中分離得到。并對它的生理活性進行了多方面的研究，發現該化合物在抗腫瘤、抗菌、殺滅寄生蟲、溶血、降血脂、抗骨質疏松、抗突變等方面都有一定的生理活性。目前已有的制備纖細薯蕷皂苷的方法基本為實驗室的流程：如Tsukamoto?Takeo等在Yakugaku?Zasshi，1954，74：1127中的報道，采用提取、反復結晶的手段從纖細薯蕷中得到纖細薯蕷皂苷；楊崇仁等在云南植物研究，1986，8(3)：355中的報道，采用提取、萃取、反復柱層析、結晶的方法從Dracaena?cambodiana的果實中得到纖細薯蕷皂苷；李伯剛等在植物學報，1986，28(4)：409中的報道，采用提取、萃取、反復柱層析、結晶的方法從黃山藥中得到纖細薯蕷皂苷；龐自潔等在中草藥，2008，39(4)：493中的報道，采用提取、萃取、反復柱層析的方法從盾葉薯蕷中得到纖細薯蕷皂苷；等等。這些制備方法，以研究藥用植物中的化學成分為主，提取、分離流程復雜，單個化合物制備量小，對纖細薯蕷皂苷的制備而言針對性不高。如果用于纖細薯蕷皂苷的開發利用，則難以適合制備工藝的要求。另外，就纖細薯蕷皂苷的有關制劑及在防治腫瘤方面的應用，未見報道。?

發明內容

針對纖細薯蕷皂苷已報道的提取分離方法復雜、制備量小、針對性不高等方面的不足。本發明采用如下方法：稱取含纖細薯蕷皂苷的藥材，投入提取罐，將配制好的3-12倍于藥材量的含水有機溶媒加入到提取罐中，浸泡藥材30-100分鐘，加熱至40-100℃，回流或其它輔助方法提取1-8小時，放出提取液，照此法重復提取2-5次，合并提取液；濃縮提取液并回收有機溶媒，趁熱放出殘留液，放置冷卻6-30小時，析出大量沉淀；減壓過濾，收集沉淀，干燥粉碎得纖細薯蕷皂苷粗品；粗品以適量溶媒反復結晶，得纖細薯蕷皂苷純品。HPLC檢測，含量95％以上。該法流程相對簡單、制備量可規模化、費用大大降低。?

本發明的另一目的是提供上述纖細薯蕷皂苷和纖細薯蕷皂苷制劑在抗腫瘤方面的應用。本發明對纖細薯蕷皂苷進行了體外、體內的抗腫瘤藥理試驗，試驗結果表明，在體外試驗中，纖細薯蕷皂苷對等人腸癌細胞HCT-15、人腎癌細胞786-0、人前列腺癌細胞PC-3、人乳腺癌細胞MDA-MB-468等腫瘤細胞都有一定的抑制作用，IC50介于1-10μg/ml之間；在體內的抗腫瘤試驗中，纖細薯蕷皂苷具有抑制小鼠Lewis肺癌、移植性肉瘤S180、移植性肝癌H22、人白血病K562細胞生長的作用。?

為了更好地理解本發明實質，本發明進行了體內、體外的主要藥效學試驗如下：?

(一)體外試驗?

1.研究目的：評價受試藥物受試藥物對四株腫瘤細胞的增殖抑制活性。?

2.研究方法：選擇四株腫瘤細胞，采用磺酰羅丹明B(sulforhodamine?B，SRB)蛋白染色法，初步評價化合物在細胞水平的增殖抑制活性。?

3.實驗結果：采用SRB方法，以阿霉素(ADR)為陽性對照，初步評價受試藥物受試藥物對四株腫瘤細胞的增殖抑制作用，結果如下所示：?

(1)對人腸癌細胞HCT-15的增殖抑制作用?

篩選方法：磺酰羅丹明B(sulforhodamine?B，SRB)蛋白染色法?

細胞株：人腸癌細胞(HCT-15)?

作用時間：72h?

結果評定：無效：抑制率10μg/ml＜50％??有效：抑制率10μg/ml＞50％?

表1.受試藥物在細胞水平對人腸癌細胞HCT-15的抑制率％?

(2)對人腎癌細胞786-O的增殖抑制作用?

篩選方法：磺酰羅丹明B(sulforhodamine?B，SRB)蛋白染色法?

細胞株：人腎癌細胞(786-0)?

作用時間：72h?

結果評定：無效：抑制率10μg/ml＜50％??有效：抑制率10μg/ml＞50％?

表2.受試藥物在細胞水平對人腎癌細胞786-O的抑制率％?