[發(fā)明專利]一種檢測(cè)p52Shc/p66Shc基因表達(dá)模式的分子診斷試劑盒及其檢測(cè)方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210066328.4
• 申請(qǐng)日: 2012-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN102618640A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉喆;馬振毅;李西川
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種檢測(cè)p52^Shc/p66^Shc基因表達(dá)模式的分子診斷試劑盒，其特征在于：試劑盒由RNA抽提體系、RNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系和PCR反應(yīng)體系組成，其中PCR反應(yīng)體系含有特異擴(kuò)增p52^Shc基因的引物的序列為：序列1和序列2；含有特異擴(kuò)增p66^Shc基因的引物的序列為：序列3和序列4。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)p52^Shc/p66^Shc基因表達(dá)模式的分子診斷試劑盒，其特征在于：所述RNA抽提體系具體包括：TRIzol、氯仿、異丙醇、75％乙醇和Nuclease-Free?Water。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)p52^Shc/p66^Shc基因表達(dá)模式的分子診斷試劑盒，其特征在于：所述RNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系具體包括：oligo(dT)₁₈、dNTP?Mix、5×Reverse?Transcript?Reaction?Buffer、Nuclease-Free?Water和Reverse?Transcriptase。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)p52^Shc/p66^Shc基因表達(dá)模式的分子診斷試劑盒，其特征在于：所述PCR反應(yīng)體系具體包括：Nuclease-Free?Water、dNTP?Mix、10×PCR?Reaction?Buffer、DNA聚合酶、引物序列1、引物序列2、引物序列3和引物序列4。

5.一種如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)p52^Shc/p66^Shc基因表達(dá)模式的分子診斷試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟如下：

(1)從臨床獲得實(shí)體腫瘤患者手術(shù)后的新鮮腫瘤樣本，用RNA抽提體系提取樣本的總RNA；

(2)使用RNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系將該總RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA；

(3)以該cDNA為模板，用PCR反應(yīng)體系通過PCR反應(yīng)分別特異擴(kuò)增p52^Shc和p66^Shc基因的目標(biāo)DNA片段，將PCR產(chǎn)物送到生物技術(shù)公司測(cè)序；

(4)分析該P(yáng)CR產(chǎn)物在SNP?rs8191981位點(diǎn)的測(cè)序峰圖，計(jì)算p66^Shc單等位基因表達(dá)模式的丟失程度，對(duì)腫瘤患者病理分型和預(yù)后作出判斷。