[發明專利]一種依諾肝素鈉酶解方法

有效

• 申請號: 201210063865.3
• 申請日: 2012-03-12
• 公開（公告）號: CN102533906A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 王春華;王玎瑋
• 申請（專利權）人: 南京健友生化制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

1.一種依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于向依諾肝素鈉溶液中加入乙酸鈉/鈣溶液和混合酶溶液，在溫度為29～31℃下酶解66～72小時；其中所述乙酸鈉/鈣溶液的pH值為7，所述混合酶中各酶的酶活比例為肝素酶I∶肝素酶II∶肝素酶III＝0.95～1.05∶1∶0.45～0.55。

2.根據權利要求1所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于所述混合酶中各酶的酶活比例為肝素酶I∶肝素酶II∶肝素酶III＝1∶1∶0.5。

3.根據權利要求1所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于所述依諾肝素鈉溶液的濃度為15～25mg/ml；所述乙酸鈉/鈣溶液的體積是依諾肝素鈉溶液體積的3～4倍。

4.根據權利要求1所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于所述混合酶溶液由肝素酶I、肝素酶II和肝素酶III溶解于磷酸緩沖溶液中制成，或者肝素酶I溶液、肝素酶II溶液和肝素酶III先分別溶解于磷酸緩沖溶液中，再混合后制成；所述混合酶溶液中各酶的濃度為0.09～0.40IU/ml。

5.根據權利要求1或4所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于所述混合酶溶液的體積是依諾肝素鈉溶液體積的4.5～5.5倍。

6.根據權利要求4所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于所述磷酸緩沖溶液的配制方法為：將磷酸二氫鉀和牛血清白蛋白一同溶解于水中后，調節pH值至7.0，加水稀釋后用濾膜過濾；所述磷酸二氫鉀和牛血清白蛋白的質量比為6.7～7∶1；磷酸緩沖溶液中磷酸二氫鉀的濃度為1.3mg/ml～1.4mg/ml；所述濾膜的孔徑在0.45μm以下。

7.根據權利要求6所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于所述磷酸二氫鉀和牛血清白蛋白的質量比為6.8∶1；磷酸緩沖溶液中磷酸二氫鉀的濃度為1.36mg/ml；濾膜孔徑為0.45μm。

8.根據權利要求1或3所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于所述乙酸鈉/鈣溶液的配制方法為：將牛血清白蛋白和乙酸鈣溶解于水中，加入冰醋酸后用氫氧化鈉調節pH值為7.0，加水稀釋后用濾膜過濾；牛血清白蛋白與乙酸鈣的質量比為1∶3.0～3.4，牛血清白蛋白與冰醋酸的質量體積比為1∶55～60mg/μL；乙酸鈉/鈣溶液中乙酸鈣的濃度為0.30～0.34mg/ml；濾膜孔徑在0.45μm以下。

9.根據權利要求8所述的依諾肝素鈉酶解方法，其特征在于牛血清白蛋白與乙酸鈣的質量比為1∶3.2，牛血清白蛋白與冰醋酸的質量體積比為1∶58mg/μL，乙酸鈉/鈣溶液中乙酸鈣的濃度為0.32mg/ml；濾膜孔徑為0.45μm。