[發明專利]檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條

無效

• 申請號: 201210063210.6
• 申請日: 2012-03-12
• 公開（公告）號: CN102590508A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 石鋒;高春花;汪俊云;楊玥濤;丁丹
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N33/68;A61K39/008;A61P33/02
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司 31128
• 代理人: 嚴新德

1.一種檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條，包括一個樣品墊、一個緊密連接于所述樣品墊的含有膠體金標記探針的金標墊、一個與所述金標墊緊密連接的纖維素膜和一個緊密連接于所述纖維素膜的吸水墊，所述的吸水墊遠離所述的金標墊，在所述纖維素膜上、靠近吸水墊的一端設置有質控線，在質控線和金標墊之間的纖維素膜上設置一條檢測線，其特征在于：所述的檢測線含有親內臟利什曼原蟲的蟲體可溶性抗原，所述的質控線含有特異性結合膠體金標記探針的抗體。

2.如權利要求1所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條，其特征在于：所述的親內臟利什曼原蟲的蟲體可溶性抗原來源于親內臟利什曼原蟲的前鞭毛體或無鞭毛體。

3.如權利要求1所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條，其特征在于：所述的膠體金標記探針為金黃色葡萄球菌A蛋白、或鏈球菌G蛋白、或鼠抗人IgG的單抗、或鼠抗人IgG的單抗多抗、或者兔抗人IgG抗體，所述質控線為抗金黃色葡萄球菌A蛋白抗體、或抗鏈球菌G蛋白抗體、或抗鼠抗人IgG的單抗、或鼠抗抗人IgG的單抗多抗的抗體、或者抗兔抗人IgG抗體的抗體。

4.如權利要求1所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條，其特征在于：所述的親內臟利什曼原蟲蟲體可溶性抗原的蛋白濃度為1-20mg/mL，噴涂量為100μL/cm²，膠體金標記探針的濃度以蛋白濃度計為?1-5mg/?15-20mL。

5.如權利要求3所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條，其特征在于：抗金黃色葡萄球菌A蛋白抗體、或抗鏈球菌G蛋白抗體、或鼠抗人IgG的單抗、或鼠抗人IgG的單抗多抗、或者兔抗人IgG抗體溶液的濃度為0.1-5mg/mL，噴涂量為100μL/cm²。

6.如權利要求1所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條，其特征在于：所述免疫層析試條背面設置有一個背板。

7.一種試劑盒，包括一個盒體，其特征在于：所述的盒體中設置有權利要求1所述的免疫層析試條，所述的盒體的一個側面上設置有一個檢測孔和一個觀測窗，所述的檢測孔位于樣品端吸水墊的上方，所述的觀測窗位于所述的檢測線和質控線的上方。

8.一種制備權利要求1所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條的方法，其特征在于：包括以下步驟：一個制備親內臟利什曼原蟲蟲體可溶性抗原的步驟，將來源于親內臟利什曼原蟲蟲體的抗原液蛋白濃度調整到1-20mg/mL；一個制備膠體金標記探針的步驟，一個制備與膠體金標記探針特異結合的抗體的步驟，所述的與膠體金標記探針特異結合的抗體的溶液濃度為0.1-5mg/mL；一個將親內臟利什曼原蟲蟲體可溶性抗原溶液噴涂到纖維素膜上形成檢測線的步驟；一個將能與膠體金標記探針特異結合的抗體溶液噴涂到所述的纖維素膜上質控線的步驟，所述的質控線和所述的檢測線相鄰設置；一個將玻璃纖維膜或聚脂膜浸入膠體金標記探針溶液中制備金標墊的步驟；將一個吸水墊粘貼在所述纖維素膜的一側，所述的吸水墊靠近質控線、遠離檢測線，將所述的金標墊粘貼在纖維素膜的另外一側，所述的金標墊靠近檢測線，將一個樣品墊粘貼金標墊的遠離所述纖維素膜的一側。

9.如權利要求8所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條的制備方法，其特征在于：所述的親內臟利什曼原蟲蟲體可溶性抗原的制備方法是將親內臟利什曼原蟲前鞭毛體或無鞭毛體接種于培養基中培養，在原蟲處于對數生長期，原蟲密度為10⁵-10⁷/mL時，2-6℃下離心收集前鞭毛體或無鞭毛體，棄上清，沉淀同法用PBS洗1-5次后，按前鞭毛體或無鞭毛體的壓積量加3-5倍體積的PBS，在液氮和35-40℃水浴中，反復凍融3-7次，然后在冰浴中超聲粉碎1-5次，2-6℃下離心，上清即為可溶性抗原。

10.如權利要求8所述的檢測親內臟利什曼原蟲感染和診斷黑熱病的免疫層析試條的制備方法，其特征在于：在一個制備膠體金標記探針的步驟中，將1-5mg金黃色葡萄球菌A蛋白、或鏈球菌G蛋白、或鼠抗人IgG的單抗、或鼠抗人IgG的單抗多抗、或者兔抗人IgG抗體加入100mL膠體金溶液，離心取沉淀，復溶到15-20mL，加入蔗糖使蔗糖的終濃度為2%-10%。

11.一種親內臟利什曼原蟲蟲體可溶性抗原的制備方法，其特征在于：將親內臟利什曼原蟲前鞭毛體或無鞭毛體接種于培養基中培養，在原蟲處于對數生長期，原蟲密度為10⁵-10⁷/mL時，2-6℃下離心收集前鞭毛體或無鞭毛體，棄上清，沉淀同法用PBS洗1-5次后，按前鞭毛體或無鞭毛體的壓積量加3-5倍體積的PBS，在液氮和35-40℃水浴中，反復凍融3-7次，然后在冰浴中超聲粉碎1-5次，2-6℃下離心，上清即為可溶性抗原。