[發(fā)明專利]一種蘿卜胞質(zhì)雄性不育分子標(biāo)記及其輔助選擇育種的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210061546.9
• 申請(qǐng)日: 2012-03-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102586244A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張魯剛;鄭晨光;于娜娜;許小勇;惠麥俠;牛娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 西安恒泰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61216
• 代理人: 李鄭建

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)的蔬菜品種選育與生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及蘿卜胞質(zhì)雄性不育的RAPD和SCAR標(biāo)記及其用于輔助選擇育種的應(yīng)用。

背景技術(shù)

近三十多年以來(lái)，植物雄性不育一直是作物遺傳育種、生物學(xué)研究的熱門(mén)領(lǐng)域。細(xì)胞質(zhì)雄性不育(cytoplasmic?male?sterility，CMS)是其中最有利用價(jià)值的雄性不育類型之一。20世紀(jì)70年代，Ogura報(bào)道了由細(xì)胞質(zhì)不育基因S和2對(duì)細(xì)胞核不育基因ms共同控制的蘿卜胞質(zhì)雄性不育(CMS)。自O(shè)gura不育胞質(zhì)發(fā)現(xiàn)以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)蘿卜雄性不育的不育機(jī)理及恢復(fù)基因進(jìn)行了多方面研究，但傳統(tǒng)的蘿卜雄性不育選育主要通過(guò)花期觀察進(jìn)行選擇，周期長(zhǎng)、速度慢。RAPD(Random?Amplified?Polymorphic?DNA)是由Williams和Welsh兩個(gè)研究小組于1990年分別研究提出，它是一種建立在PCR基礎(chǔ)上的能對(duì)整個(gè)未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的DNA分子標(biāo)記技術(shù)。RAPD標(biāo)記技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、檢測(cè)容易迅速、特異性強(qiáng)、DNA樣品用量少等特點(diǎn)；但RAPD反應(yīng)條件不嚴(yán)謹(jǐn)，其重復(fù)性較差，需要轉(zhuǎn)化成較穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記。序列特異擴(kuò)增區(qū)域(Sequence?Characterized?Amplified?Region，SCAR)是由Paran和Michelmore于1993年提出并應(yīng)用的，它以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定，可以更有效快速的識(shí)別由RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化而來(lái)的新標(biāo)記，由于SCAR標(biāo)記通常為顯性標(biāo)記，所以通過(guò)轉(zhuǎn)化可以使RAPD標(biāo)記的穩(wěn)定性和信息量得以增加。

分子標(biāo)記輔助育種(marker?assisted?selection，縮寫(xiě)為MAS)是分子育種的一種，其基本原理是利用與目標(biāo)基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，通過(guò)對(duì)待選個(gè)體目的片段的檢測(cè)篩選目標(biāo)基因個(gè)體，從而達(dá)到提高育種效率的目的。MAS可以在植物生長(zhǎng)的任意階段進(jìn)行，不受時(shí)間、標(biāo)記數(shù)量和環(huán)境的限制；對(duì)于如病害、抗性等后期性狀，可以在苗期即進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)早期預(yù)防和控制減少后期人力、物力和財(cái)力的浪費(fèi)；對(duì)于表型難以確定或者性狀連鎖遺傳基因，可以通過(guò)分子標(biāo)記方法與傳統(tǒng)育種方法相結(jié)合，有目的地將有利基因聚合；此外，其還可以鑒別顯性和共顯性標(biāo)記，從而免去后代的再鑒定，縮短育種年限。

自從20世紀(jì)70年代開(kāi)始，西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院蔬菜科學(xué)系在蘿卜種質(zhì)資源、新品種選育和胞質(zhì)雄性不育系進(jìn)行了大量研究，育成了細(xì)胞質(zhì)雄性不育材料。由于不育性傳統(tǒng)的選育方法需要等到花期通過(guò)田間直接觀察完成，對(duì)于攜帶恢復(fù)基因的優(yōu)良材料，要將其轉(zhuǎn)育為不育系，必須經(jīng)過(guò)雜交、自交，同時(shí)用不育系測(cè)交判斷其基因型等過(guò)程，操作起來(lái)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，周期長(zhǎng)，育種進(jìn)程慢。為了加快蘿卜胞質(zhì)雄性不育育種速度，采用現(xiàn)代生物技術(shù)，進(jìn)行分子標(biāo)記輔助育種十分迫切。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種蘿卜胞質(zhì)不育的RAPD和SCAR標(biāo)記及其采用該標(biāo)記用于輔助選擇育種的方法。本發(fā)明利用RAPD技術(shù)，得到與育性基因緊密連鎖的RAPD分子標(biāo)記，然后將RAPD分子標(biāo)記成功轉(zhuǎn)化SCAR標(biāo)記，為開(kāi)展蘿卜胞質(zhì)不育分子標(biāo)記輔助育種奠定基礎(chǔ)。

為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案：

一種蘿卜胞質(zhì)雄性不育的RAPD標(biāo)記，其特征在于，該RAPD標(biāo)記是特異片段S88-1526(1526bp)和特異片段S1344-415(415bp)，其核苷酸序列分別為：

特異片段S88-1526(1526bp)：