[發明專利]高通量多肽合成的方法及其裝置

無效

• 申請號: 201210061145.3
• 申請日: 2012-03-09
• 公開（公告）號: CN102532252A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 姚紀文;何英偉;鄒建炫;祝召虎;吳純;袁國華;謝雪原
• 申請（專利權）人: 百奇生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

技術領域

本發明屬于化學領域，具體涉及一種高通量多肽反應裝置。

背景技術

固相多肽合成技術是1963年出現的一種多肽合成技術，是將化學反應從純液相條件移植到固相體系中。在固相多肽合成中，具有活化末端的固相樹脂球是合成操作的核心，攜有保護基團的氨基酸作為反應物與固相樹脂球的活化末端發生反應，隨后經過簡單的過濾和洗滌操作，將多余的反應物和溶劑去除；之后用化學或者物理手段脫去氨基酸末端保護，將樹脂珠與另一種氨基酸試劑進行反應，如此往復，最終用化學手段將合成完成的多肽從樹脂上剝落，便可以獲得所需序列的多肽。

固相多肽合成中的氨基酸有兩種常用的保護方式，即Fmoc化學和tBoc化學保護方式，從這兩種保護方式中演變出兩種多肽合成策略。其中Fmoc化學策略是現今最常用的合成策略。Fmoc化學多肽合成方法的合成順序是從多肽序列的C端（羧基端）向N端（氨基端）進行氨基酸組裝。具體合成過程是由下列幾部分組成：

1、氨基酸鍵連反應：將序列羧基端的氨基酸鍵連到固相樹脂球上。

2、縮合循環：縮合循環是將各個氨基酸組裝成肽鏈的過程。作為合成肽的構件，氨基酸具有-NH2基及-COOH基兩個活性基團，在進行接肽縮合時必須對其中的-NH2基進行臨時性保護（例如用Fmoc基團進行保護），當縮合完成后再用特定條件（例如哌啶溶液）脫除α-氨基上的臨時保護基。因此每個縮合循環都包括縮合及脫保護兩步反應。

（1）縮合反應：縮合反應也稱為偶聯反應，是將帶有臨時保護基的氨基酸的-COOH基用活化試劑進行活化，活化后的氨基酸和已經鍵連在固相樹脂球上的氨基酸的-NH2基進行偶聯反應，在反應完全后進行脫除保護反應。

（2）脫除保護反應：用特定條件（例如哌啶溶液）將已經連接在固相樹脂球上的氨基酸的α-氨基上的臨時保護基團進行脫除的反應。整個縮合循環過程就是縮合反應與脫除保護反應的循環。

3、裂解反應：當目標肽的主序列組裝完全后，使用特定的條件（例如TFA溶液）脫除肽鏈的側鏈保護基并將肽鏈從固相樹脂球上切除的反應。

目前，多肽合成的步驟比較繁瑣，通常采用昂貴的合成儀器，或使用玻璃柱多肽合成反應器通過人工逐一完成每件工序。合成儀器的費用太高，而通過玻璃柱多肽合成反應器單次最多只能合成10條多肽，其工序繁瑣、反應量小、效率低下。

發明內容

本發明提供了一種解決上述問題的方案，提供一種簡便的多肽合成方法及其專用設備。

本發明的技術方案是提供一種高通量多肽合成的方法，其特征在于：其包括以下步驟：

1）將固相樹脂球充分溶脹后，分裝到反應板的每個反應室里;

2）加入DMF（N,N-二甲基甲酰胺）到反應室內對固相樹脂球進行清洗后，加入20%哌啶DMF溶液將固相樹脂球上所鍵連的氨基酸的臨時保護基脫除；

3）用DMF（N,N-二甲基甲酰胺）溶劑對脫除了保護基的固相樹脂球進行洗滌；

4）將氨基酸反應試劑加入到反應板的每個反應室中；

5）開啟脈沖氮氣，攪動反應室里的固相樹脂球，以促進縮合反應進行；

6）縮合反應完成后，加入DMF（N,N-二甲基甲酰胺）對固相樹脂進行清洗，然后返回到步驟2，進入下個循環；

7）當目標肽主鏈序列合成完畢后，加入DCM（二氯甲烷）對固相樹脂球進行清洗、吹干，加入裂解液把多肽從固相樹脂球上裂解下來；然后，使用乙醚溶液將多肽從裂解液中沉淀，清洗沉淀得到的多肽，最后用20%乙腈水溶液溶解，凍干后即可得到未經純化的多肽。

該方法專用的高通量多肽反應裝置，其包括上部開口的底盒和可將所述底盒的開口封閉的反應板，其特征在于：所述底盒的側面和/或底面設置有至少一個進氣口和一個排液口，所述反應板上設置有若干個排列整齊的反應室，所述反應室均包括入口和位于所述底盒內腔中的出口，所述出口通過砂芯封閉。

優選的，所述反應板上設置有8排6列共48個所述反應室。

優選的，所述反應板上設置有8排12列共96個所述反應室。

優選的，所述進氣口和所述排液口共用一個設置在所述底盒側面的通孔。

優選的，所述通孔管道連接三通，所述三通分別連接氮氣管和廢液管，所述三通上設置有一單向導通的閥門。

優選的，所述底盒為長方體形。

優選的，所述底盒上可拆卸地設置有一口形接口板，一口形壓板通過螺絲將所述反應板連接在所述接口板上，所述接口板和所述反應板之間設置有口形密封墊。