[發明專利]一種奶制品中三聚氰胺的快速檢測方法

無效

• 申請號: 201210060848.4
• 申請日: 2012-03-09
• 公開（公告）號: CN102608073A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 黃承志;祁文靜
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: G01N21/55
• 分類號: G01N21/55;G01N21/78
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

技術領域

本發明涉及三聚氰胺的檢測方法。

背景技術

三聚氰胺，由于其本身含氮量高達66%，經常被非法商利用摻雜在牛奶或者動物飼料中以達到提高蛋白含量的目的。這種在牛奶或動物飼料中非法添加的三聚氰胺已經導致了嬰兒的腎結石甚至是死亡事件，因而最近人們很關注三聚氰胺的檢測。

目前檢測三聚氰胺的方法主要有高效液相法（HPLC）、高效液相與質譜聯用（HPLC-MS）等方法，然而這些方法涉及到大型儀器，不利于快速的實時分析檢測。針對目前現有的檢測方法的現狀發展一種新的操作簡單、靈敏、快速檢測三聚氰胺的方法是很有意義的。

發明內容

本發明的目的就是針對現有技術存在的不足，基于三聚氰胺和胸腺嘧啶（T堿基）分子間三個氫鍵的原理，在水溶液的緩沖體系下，利用polyT₅₅纏繞的金納米顆粒，建立了一種快速、靈敏地檢測奶制品中三聚氰胺的方法，該方法具有較高選擇性和靈敏度，免修飾，操作簡單，不需要大型儀器；同時，該方法還拓展了三聚氰胺—胸腺嘧啶模式的三個氫鍵結構在水相分析檢測的體系中的應用。

通常三聚氰胺—胸腺嘧啶模式的三個氫鍵結構只有在固相表面，氣象液相界面，有機相中或者超真空條件才能形成。本申請人設計了在水溶液條件下，基于三聚氰胺和胸腺嘧啶分子間三個氫鍵的原理建立一種簡單快速的檢測三聚氰胺的方法。

目前，這種三個氫鍵的結構應用在水相中的分析檢測體系里的報道很少。申請人發現，四種DNA的堿基里，只有T堿基可以與三聚氰胺形成這種類似的三個氫鍵的結構，因此申請人以金納米顆粒為材料，發明了這種具有很高的特異性、高靈敏且可視化檢測奶制品中三聚氰胺的方法。

本發明方法步驟如下：

1.操作步驟

（1.1）處理牛奶樣品：將牛奶樣品先用純凈水溶解至總體為50?mL，之后再稀釋10倍后用超濾膜超濾，20000?rpm離心30?min后，取上層清夜稀釋10000倍；

（1.2）DNA?polyT₅₅與金納米顆粒AuNPs的孵育：在離心管中加入摩爾比為1:23的金納米顆粒AuNPs和DNA?polyT_55，，渦混合均勻，室溫反應5?-10?min；

（1.3）然后再依次加入需要檢測的奶制品和相當于溶液混合物總體積1/5的pH?7.6?NaH₂PO₄-Na₂HPO₄緩沖溶液，旋渦混合均勻后5-10?min；

（1.4）?采用PRLS測定，在測定散射光譜時，設置激發波長和發射波長相等，即???????????????????????????????????????????????_em?=?_ex。

2.結果分析：

（2.1）光譜特征：若在520?nm?處有等離子共振吸收峰，在550?nm處的散射強度逐漸增強，在620nm處的吸收也呈現線性增強的趨勢，則表明奶制品中含有三聚氰胺；

（2.2）形態變化：若觀察到金納米顆粒溶液變成紅色，或成紅色過渡到紫色最后變為藍色，也表明奶制品中含有三聚氰胺。

本發明的原理如示意圖1所示，polyT₅₅纏繞在金納米顆粒AuNPs表面，金納米顆粒處于分散狀態；當加入三聚氰胺后，由于三聚氰胺和胸腺嘧啶分子間三個氫鍵的作用，金納米顆粒發生聚集。利用金納米顆粒的聚集分散狀態達到檢測三聚氰胺的目的。

為評估該方法用于實際測定的選擇性，針對牛奶中常見的無機離子及一些共存物的干擾進行了考察，只有蛋白質對該檢測有一定的干擾。由于蛋白會吸附在金納米顆粒表面起保護作用使得金納米顆粒聚集程度變弱。因而我們在牛奶樣品檢測時，先用超濾的方式出去分子量較大的蛋白防止其對金納米顆粒的聚集產生影響。