[發明專利]氯蟲苯甲酰胺抗原及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201210060248.8
• 申請日: 2012-03-08
• 公開（公告）號: CN102627628A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 劉尚鐘;崔永亮;徐川;王毅;劉峰;王磊;歐俊軍;南鐵貴;譚桂玉;王敏;曹振;孫碩
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07D401/04
• 分類號: C07D401/04;C07D401/14;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.?

式A

所述式A中，n為2-6的整數。

2.一種制備權利要求1所述式A所示化合物的方法，包括如下步驟：將氨基酸和2-[3-溴-1-(3-氯-2-吡啶基)-1H-5-吡唑]-6-氯-8-甲基-4H-苯并[d][1，3]惡嗪-4-酮于有機溶劑中混勻進行反應，反應完畢得到式A所示化合物。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述氨基酸選自氨基乙酸、氨基丙酸、氨基丁酸、氨基戊酸和氨基己酸中的至少一種，優選氨基丁酸；

所述氨基酸和2-[3-溴-1-(3-氯-2-吡啶基)-1H-5-吡唑]-6-氯-8-甲基-4H-苯并[d][1，3]惡嗪-4-酮的投料摩爾配比為10∶1，優選1.2∶1；

所述反應步驟中，溫度為0-50℃，優選25℃，時間為6-48小時，優選12小時；

所述有機溶劑選自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜和四氫呋喃中的至少一種，優選N，N-二甲基甲酰胺；

所述制備權利要求1所述式A所示化合物的方法，還包括如下步驟：在反應完畢后將反應體系倒入水中，調節pH值為3，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相后干燥，旋轉蒸發去除溶劑，并用由體積比為3∶1的正己烷和乙酸乙酯組成的混合液重結晶。

4.式B所示化合物，

式B

所述式B中，n為2-6的整數。

5.一種制備權利要求4所述式B所示化合物的方法，包括如下步驟：將權利要求1所述式A所示化合物、N-羥基琥珀酰亞胺與下述兩化合物中的任意一種于有機溶?劑或水中混勻進行反應得到所述式B所示化合物：二環己基碳二亞胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述有機溶劑均選自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜和四氫呋喃中的至少一種，優選N，N-二甲基甲酰胺；

所述式A所示化合物、N-羥基琥珀酰亞胺與二環己基碳二亞胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的投料摩爾比為1∶1-5∶1-5，優選1∶1.3∶1.1；

所述反應步驟中，溫度為0-50℃，優選25℃，時間為4-24小時，優選8小時。

7.式C所示化合物，

式C

所述式C中，n為2-6的整數。

8.一種制備權利要求7所述式C所示化合物的方法，包括如下步驟：將權利要求4所述式B所示化合物與載體蛋白溶液混勻進行偶聯反應，反應完畢得到所述式C所示化合物。

9.根據權利要求7所述的化合物或權利要求8所述的方法，其特征在于：所述載體蛋白選自牛血清蛋白、卵清蛋白和血藍蛋白中的至少一種，優選牛血清蛋白或卵清蛋白；所述式B所示化合物與載體蛋白溶液中所述載體蛋白的投料摩爾比為5-30∶1，優選15∶1；

所述偶聯反應步驟中，溫度為0-50℃，優選4℃，時間為8-36小時，優選12小時，pH值為5-9，優選7.5。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述載體蛋白溶液按照包括如下步驟的方法制備而得：將載體蛋白與緩沖液混勻得到所述載體蛋白溶液；其中，所述緩沖液選自碳酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液和4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中的至少一種，所述緩沖液的pH值均為7.5；

所述制備式C所示化合物的方法，還包括如下步驟：在所述偶聯反應之后，將反應體系進行透析；所述透析步驟中，所用透析液為pH值為7-10、濃度為0.01-0.2mol/L的PBS溶液，優選所述透析液的pH值為7.5，濃度為0.1mol/L；

所述透析步驟中，所述pH值為7-10、濃度為0.01-0.2mol/L的PBS溶液按照如下?方法制備而得：將NaCl、KH₂PO₄和Na₂HPO₄·12H₂O以質量比8.0∶0.2∶2.96的比例溶于水中，用水定容到1L。

11.由權利要求7所述化合物得到的抗體。

12.權利要求7所述化合物和/或權利要求11所述抗體在檢測樣品中氯蟲苯甲酰胺中的應用；

權利要求7所述化合物和/或權利要求11所述抗體在制備用于檢測樣品中氯蟲苯甲酰胺的酶聯免疫試劑盒、氯蟲苯甲酰胺的發光免疫試劑盒或免疫親和色譜柱中的應用；所述檢測樣品為水體、藥品、食品或土壤。?