[發明專利]松脂醇活性物質的酶促合成方法

有效

• 申請號: 201210060074.5
• 申請日: 2012-03-08
• 公開（公告）號: CN102605001A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 萬云洋;杜予民
• 申請（專利權）人: 中國石油大學(北京)
• 主分類號: C12P7/00
• 分類號: C12P7/00;C12P7/22
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾

技術領域

本發明涉及一種松脂醇活性物質的合成方法，尤其涉及一種松脂醇活性物質的酶促合成方法，屬于活性化合物合成技術領域。?

背景技術

松脂醇是我國特產中草藥杜仲中的活性成分之一，在我國已有幾千年的使用史，最早有文字可查的記載上溯到東漢初年(約公元25年)成書的《神農本草經》。?

現代研究表明，松脂醇和它的單甲基酯、雙甲基酯和β-D-糖苷等衍生物，都具有抑制環腺苷酸磷酸二脂酶活性，以及抗高血壓和抑制腫瘤等功能，杜仲的藥理功能主要來自于其中的松脂醇等活性成分。傳統的松脂醇一般從植物中分離，或者通過化學法合成，以松樹為原料進行分離時分離率最高為20-25％，以杜仲為原料進行分離時的分離率約為10％，化學法具有合成步驟多而繁瑣、反應復雜、副產物多、后處理煩瑣等缺點，更重要的是對環境有嚴重的影響。?

因此，現在一個研究的熱點方向是尋找一種高效的催化劑，在水或水溶性溶劑體系中催化合成目標產物。真菌漆酶和植物漆酶是兩大類對化合物的催化具有不同的作用。有資料表明，國內外對漆酶催化過程中，由于沒有解決溶劑使用上的問題，對于此類生物催化劑的高效使用上存在很大不足，仍然存在嚴重的過程污染。?

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的在于提供一種松脂醇活性物質的制備方法，通過采用高效的生物催化劑，并在水溶性溶劑體系中進行反應制備得到松脂醇活性物質，該方法具有原料廉價易得，催化劑制備容易，一步反應快捷，后處理簡單，產率較高，對環境污染較小等特點。?

為達到上述目的，本發明提供了一種松脂醇活性物質的酶促合成方法，其包括以下步驟：?

將水或磷酸鹽緩沖液與水溶性有機溶劑混合得到混合溶液；?

將松脂醇底物加入所述混合溶液中；?

加入漆樹酶在20-45℃下反應48-96小時；?

反應完后，向反應產物中加入適量甲醇和酒石酸鈉，然后對反應產物進行乙酸乙酯?萃取、無水硫酸鈉干燥和濃縮處理，然后進行甲醇重結晶得到結晶物或者硅膠柱層析濃縮純化得到層析物；?

對結晶物或層析物進行氮吹或冷凍干燥，得到松脂醇活性物質。?

本發明所提供的上述酶促合成方法是在水溶性溶劑體系中，使松脂醇的原料在漆樹酶作為催化劑的情況下反應制備得到松脂醇活性物質。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，優選地，在混合溶液中，水或磷酸鹽緩沖液的體積含量為5-95％。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，優選地，所采用的磷酸鹽緩沖液的pH值為6-8，即所采用的磷酸鹽緩沖液為pH值6-8的磷酸鹽緩沖液。?

本發明所采用的磷酸鹽緩沖液可以是本領域中任何所常用的磷酸鹽緩沖液，優選地，所采用的磷酸鹽為磷酸氫鈉和/或磷酸氫鉀等。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，優選地，所采用的水溶性有機溶劑為丙酮、乙醇、甘油、二氧六環、乙酸、乙腈、甲醇、丙醇、乙二醇、異丙醇和四氫呋喃中的一種或幾種的組合。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，所采用的松脂醇底物可以是任何常用的物質，優選地，本發明所采用的松脂醇底物為松柏醇和/或異丁香酚等。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，優選地，甲醇與水溶性有機溶劑等摩爾量，酒石酸鈉為水或磷酸鹽緩沖液的摩爾量的二分之一。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，優選地，硅膠柱層析中所采用的淋洗劑為正己烷和乙酸乙酯，二者的體積比為4∶1。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，優選地，松脂醇底物在混合溶液中的濃度為0.01-0.1mol/L。在本發明中，所采用的松脂醇底物可以是松柏醇或異丁香酚等，松脂醇底物的添加量可多可少，在以分離量的可得基礎上，優選地，松脂醇底物的添加量為0.5mmol以上。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，漆樹酶只是一種催化劑，目的就是為了減少其用量，但保證反應完成，達到最大的經濟性和環保性，即使酶的用量少點，反應速度差點，在分析量產率可得的情況下，漆樹酶的添加量越少越好；優選地，以混合溶液計，漆樹酶的添加量為1-10μg/mL。?

在本發明提供的上述酶促合成方法中，優選地，該方法還包括對利用乙酸乙酯進行萃取得到的萃取物進行飽和氯化鈉洗滌的步驟。利用飽和氯化鈉進行洗滌的步驟的目的?是脫氣和水溶性溶劑，其用量只要能夠達到上述目的即可，一般其添加量與所添加的水或磷酸鹽緩沖液等質量即可。?

本發明提供的上述酶促合成方法具有以下優點：?

1、配置水溶性溶劑體系進行反應，解決了物質相不溶的問題；?