[發明專利]米根霉RH1-5及其分離培養方法

有效

• 申請號: 201210059655.7
• 申請日: 2012-03-08
• 公開（公告）號: CN102634460A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 吳建峰;孫瑩;季方;張培訓;楊艷
• 申請（專利權）人: 江蘇今世緣酒業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12Q1/04;C12R1/845
• 代理公司: 淮安市科翔專利商標事務所 32110
• 代理人: 韓曉斌

技術領域

本發明涉及霉菌類微生物及分離培養方法，具體涉及一種米根霉RH1-5及其分離培養方法。?

背景技術

大曲作為濃香型曲酒的糖化發酵劑，在培養過程中經過一定富集、培養、自然篩選、馴化形成了特殊的微生物系，為曲酒生產發酵提供豐富而有益的微生物菌源，從而形成代謝產物的多樣性，即香味成份的復雜性，同時大曲還是復合酶制劑，大曲中含有淀粉酶、糖化酶、酒化酶、酯化酶、蛋白酶等多種酶系，為形成復雜的香氣成份提供催化劑。但受環境微生物的影響，大曲微生物菌系繁雜，其糖化力波動較大，直接影響大曲在釀酒過程中的糖化效果。?

發明內容

本發明的目的在于：提供一種米根霉RH1-5及其分離培養方法，通過該分離培養方法獲得米根霉RH1-5，分離培養方法工藝簡單，米根霉RH1-5糖化力波動較小，穩定大曲在釀酒過程中的糖化效果。?

本發明的技術解決方案是：該米根霉RH1-5菌株是從濃香中高溫大曲中分離篩選而得，菌種已于2011年11月29日在北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為：CGMCC?No.?5513，分類命名：米根霉??Rhizopus?oryzae。?

所述米根霉RH1-5的分離培養方法是：取中高溫大曲適量粉碎后稱取10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液1.0mL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度，取10^－2、10^－3、10^－4稀釋度的樣品各1mL加入直徑為90mm無菌培養皿中，分別采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、孟加拉紅瓊脂培養基、察氏培養基進行平板培養，搖勻后置于恒溫培養箱中28℃-32℃倒置培養3-5天；挑取培養皿內形態規則的菌落，在麩皮汁固體斜面培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為霉菌后保藏于麩皮汁固體斜面培養基備用；將所得霉菌菌株點種于篩選培養基平板上，用透明圈法進行糖化霉菌初篩，篩出產糖化酶能力強的微生物，最終篩選出一株霉菌，經26S?rDNA序列同源性分析鑒定為米根霉，命名RH1-5。?

所述麩皮汁固體斜面培養基：在1.0L麩皮汁中加入其質量1%葡萄糖、0.5%酵母膏、1%瓊脂，PH自然，121℃滅菌15min；其中，麩皮汁制備：加入5-6倍于麩皮重量的水，攪拌均勻煮沸30min，取出過濾得麩皮汁。?

所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA培養基）：將200克馬鈴薯去皮切成小塊，于鍋中加水1000毫升煮沸半小時，用雙層紗布過濾，取其濾液加蔗糖或葡萄糖20克、瓊脂10克，煮沸融化并補水至1000毫升。?

所述孟加拉紅瓊脂養基:購于上海國藥集團。?

所述察氏培養基：三角瓶中加入硝酸鈉3克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂(MgSO₄·7H₂O)?0.5克、氯化鉀?0.5克、硫酸亞鐵0.01克、蔗糖30克、瓊脂10克、蒸餾水1000毫升，加熱溶解得混合液，?121℃殺菌20min，冷卻后添加混合液質量的0.05％去氧膽酸鈉，再每100ml培養基中加入100ul鏈霉素。?

所述篩選培養基（g/L）：由可溶性淀粉10g、K₂HPO₄?0.3?g、MgCO₃或MgSO₄1g、NaCl?0.5g、KNO₃?1g、瓊脂10g組成，pH7.2－7.4，121℃滅菌30min。?

本發明對大曲中的微生物進行分離篩選獲得一株霉菌——米根霉，與實驗室現有的保藏菌株進行性能對比試驗，結果表明該菌株不僅糖化力高，而且耐酸、耐高溫，適宜于釀酒窖池發酵的酸性環境，有益于培養制作強化高溫大曲，對提高出酒率具有重要的意義。?

具體實施方式

下面結合具體的實施例進一步說明本發明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術解決方案的限制。?

實施例1：依以下步驟分離培養米根霉RH1-5?